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前言 在HIV-1感染中，HIV或其它感染所导致的抗原刺激可以导致淋巴细胞的过度活化，这种活化是导致机体免疫功能失调的重要因素之一。淋巴细胞活化提供了利于HIV持续复制的体内环境，同时导致淋巴细胞对同类抗原不能产生应答而丧失功能。HIV感染靶细胞除了与细胞表面CD4受体结合外，还需要第二受体的作用。第二受体CCR5主要表达在活化的淋巴细胞表面，而CXCR4则主要表达在静息淋巴细胞表面。由于在感染的不同阶段HIV所应用的第二受体不同，而细胞活化又是HIV感染得以建立的重要条件，据此推测，HIV感染不同阶段的靶细胞应该既表达特定受体同时又处于活化状态。HIV感染者免疫系统活化使得淋巴细胞表面标志活化的抗原表达发生改变，其中HLA-DR的上调即为淋巴细胞活化的主要标记之一。 虽然国外已有大量文献报道了HIV感染中淋巴细胞活化对于感染建立及疾病进展的重要意义，但我国尚未见相关报道。由于亚洲人群与欧美人群的不同，在HIV感染中，两者许多免疫指标存在着差异。本文对我国HIV-1感染者淋巴细胞活化及其与第二受体表达关系进行了研究，以确定上述指标在评价我国HIV感染者免疫状态中的作用。 材料和方法 1．研究对象 24例HIV-1阳性标本来源于中国医科大学附属一院艾滋病确认实验室和新疆戒毒所，HIV－l阳性者经WB试验确认。其中，男性18名，女性6名，年龄分布为19－41岁，传播途径以静脉吸毒为主。选择13例健康未暴露于＊－l者为对照。用EDTA管采集全血进行FACS分析。 2．实验设备及试剂 主要实验设备及试剂均购自 BECTON DICKINSON公司，包括流式细胞仪（FACSCalibur入 10毫升 EDTA抗凝管JD4绝对计数管；免洗溶血素及下列各种单克隆抗体：TiTEST CD4／CDS／CD3试剂，FTYC标记的抗CD4和抗CDS单抗％标记的抗u 和抗CXCR4单抗以及PeniP标记的抗H LALA－DR单抗。 3．CD4绝对值计数 将20dCD4／CDS／CD3 TiTEST试剂加人CD4绝对计数管中，加人50ul抗凝血，室温避光15ndn，加人免洗溶血素450ul，室温避光15min，FACS MULTSET软件检测并进行自动分析，计算CD4＼CDS＼CD3“T淋巴细胞绝对值及相应比值等。4．全血纫胞表面受体染色 对每名＊V－l感染者应用以下FITC／PE／PeffiP标记单抗组合进行三色分析：CD4／CCRS／HLA－DR；CD4／CXCR4／HLA－DR；CDS／CCRS／HLA－DR；CDS／CXCR4／H＊－DR，另设二管不加抗体，二管只加 FITC标记的 CD4单抗。加人 80ul抗凝血，按上述组合依次加人不同单抗各6ul，室温避光30ndn。加人溶血素2毫升，室温，1200r／ndn离心sndn，弃上清。加人ZInl PBS悬浮，室温，1200r／ndn离心sndn，弃上清，洗涤两次。加人0．5％多聚甲醛的 PBS 500ul悬浮，FACS CELLQUE盯软件进行检测分析。 5．流式细胞仪分析 用于三色荧光标记法流式细胞术测定的激发光为氖离子激光488urn谱线，使用前向散射角（hC）及侧向散射角uSC）确定淋巴细胞群，再分别以 cro”人”T淋巴细胞为门，分析 cm”、 ·2· CDS”T淋巴细胞及分别表达 CCRS、CXC地的 Cm”、CDS”T淋 巴细胞表面活化分子HLA—DR的表达。 “6．统计学分析 南SPSS10．0统计软件包进行统计学分析。检验数据为偏态 分布，故经对数转化后计算几何平均值。病人与健康对照淋巴细 胞表面活化分子的表达经对数转换后用t检验进行均值的比较。 CXCR4R4丫D4D4”T淋巴细胞与 CCRS”CD4D4“T淋巴细胞以及 CX－ CM”CDS”T淋巴细胞与 CCRS”CDS”r淋巴细胞上 HLA－DR 分子表达的比较用配对 t检验来进行比较。用 Speannan秩相关来 比较 CD4％＊D4丫D3”T淋巴细删CD3”T淋巴细胞人D4百分 率）与其它变量的相关性。 结 果 1．HIV八感染者 CD4”T淋巴细胞计数 24名 HIV－互感染者 CD4“T淋巴细胞值为门80。171）X 10’几，除一例有腹泻症状（D4 268 X 10～V，其余均为无症状 HIV感染者人D4百分率为30．5％。8．9％。 2．HIV叫感染者淋巴细胞表面HLA一DR的表达 通过对HIV叫感染者及健康对照全血标本的FACS分析发 现，HIV刁感染者 CDS”T淋巴细胞 HLA－DR的表达为 45．l％ （几何平均值，95％CI：39．5，50．5人健康对照则为 27．4％（几何平 均值，95％CI：22．93．9hHIV－二感染者 CDS”T淋巴细胞的活 化程度明显高于健康对照汀＜0．001X而CD4”T淋巴细胞的活 化程度与健康对照则无明显差异。 3．HIV－l感染者表达不同第H受体的淋巴细胞的活化 HIVJ感染者表达比 人XCR4的 T淋巴细胞 HLA－DR 的表达均高于健康对照，其中 CDS”CCRS”T淋巴细胞及 CDS” ·3·CXCR4”T淋巴细胞的活化增高与健康对照相比差异显著＊”