腺苷A2A受体在孕期烟熏抑制新生大鼠基本节律性呼吸放电中的作用

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呼吸作为人类的四大生命体征之一,它是每个生命存在的前提和基本条件。简单来说它是一种由呼吸中枢调配的包括肋骨、肋间肌、肺等组织参与的有节律的收缩和舒张运动。人类的呼吸中枢包括脊髓、延髓、脑桥、间脑、大脑皮层等组织,这些中枢各司其职,作用各不相同,其中延髓的主要作用是产生呼吸的基本节律。  妊娠期的女性如果经常吸烟或长期处于烟熏环境中,燃烧的烟草产生的有毒物质会对胎儿组织发育造成不可逆的损害,如:缺氧、流产、畸形、发育迟缓等。已有研究显示,妊娠期妇女如果长期处于烟雾中,其子代呼吸的潮气量就会减少,呼吸频率就会增加,且新生儿呼吸暂停的发生率会增高。目前对于孕期烟熏对新生哺乳动物的延髓呼吸中枢功能的研究,尤其是关于腺苷A2A受体在其中作用的研究尚不多见。  目的:  研究孕期烟熏对离体延髓脑片基本节律性呼吸放电的抑制作用和腺苷A2A受体是否参与该抑制作用,为临床相关疾病的防治提供新的思路和实验依据。  方法:  1.记录脑片基本节律性呼吸放电12周龄Sprague-Dawley大鼠分笼饲养1周后按2∶1的雌雄比例进行合笼饲养。在合笼时,将大鼠随机分为对照组和孕期烟熏组。对照组大鼠不进行烟熏处理。烟熏组大鼠每天进行烟熏处理2次,每次烟熏30min,直至生产。分别选取出生2天的大鼠幼崽制做成离体的延髓呼吸放电脑片,并记录脑片产生的基本节律性呼吸放电(Basic Rhythm Discharging Action,RRDA)。研究腺苷A2A受体拮抗剂SCH58261和激动剂CGS21680对对照组新生大鼠和孕期烟熏暴露组新生大鼠延髓RRDA的作用,分析腺苷A2A受体在孕期烟熏暴露抑制子代延髓呼吸中枢中所起的作用。  2.形态学改变分别将两组新生大鼠脑片4%甲醛固定后制作成HE组织切片,观察面神经后核内侧区神经元数量和形态改变。  3.神经元超微结构改变分别将两组新生大鼠脑片25%戊二醛固定后,用电子透射显微镜观察面神经后核内侧区的神经元突触的改变。  4.腺苷A2A受体表达蛋白免疫印迹法检测两组新生大鼠脑片面神经后核内侧区神经元腺苷A2A受体表达。  结果:  1.对照组和烟熏暴露组脑片放电60min内稳定无衰减,实验模型稳定可靠。对照组放电积分幅度(integral amplitude,IA)是92.78±6.54,吸气时程(inspiratory time,TI)是93.51±6.76,呼吸周期(respiratory cycle,RC)是94.10±6.86,烟熏组IA是90.54±6.14,TI是88.77±6.43,RC是101.54±6.66,差异有意义(P<0.05);说明对照组脑片放电强于烟熏暴露组。用腺苷A2A受体激动剂CGS21680灌流两组脑片后对照组TI、IA、RC改变百分比为17.15±1.63、21.59±3.59、20.25±2.36,烟熏组改变百分比为9.67±2.50、11.15±2.33、10.10±1.87,差异有意义(P<0.05),激动剂CGS2168对对照组和烟熏暴露组脑片放电都有兴奋作用,对照组兴奋效果强于烟熏暴露组。用腺苷A2A受体拮抗剂SCH58261灌流两组脑片后对照组TI、IA、RC改变百分比为22.40±2.62、22.97±2.59、16.78±3.09,烟熏组改变百分比为9.55±2.73、11.56±2.07、8.39±2.34,差异有意义(P<0.05),拮抗剂SCH58261对对照组和烟熏暴露组脑片放电都有抑制作用,对照组抑制效果强于烟熏暴露组。  2.HE切片显示烟熏暴露组面神经后核内侧区神经元密度低于对照组。  3.电镜图片显示与对照组相比较烟熏暴露组神经元数量减少,细胞器减少;突触前膜的囊泡数量减少,突触面积缩小,间隙变窄形状不规则,突触后膜增厚。  4.蛋白免疫印迹法发现烟熏暴露可以降低面神经后核内侧区神经元腺苷A2A受体表达水平。  结论:  孕期烟熏暴露抑制了新生大鼠延髓脑片RRDA,下调腺苷A2A受体表达水平、降低腺苷A2A受体活性,减少面神经后核内侧区神经元和突触数量、改变突触结构、降低细胞器密度;孕期烟熏抑制子代延髓呼吸中枢发育。
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