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双生病毒是—类单链环状DNA病毒,已在世界范围内的多种作物上造成严重危害。自20世纪90年代起,双生病毒已在我国的云南、广西、海南和台湾等多个地区的作物和杂草上发生。为进一步明确我国双生病毒的种类分布及危害,本研究对我国云南巧家辣椒和赛葵,以及陕西番茄和四川赛葵上的双生病毒进行了分子鉴定。从云南巧家地区表现为黄化曲叶症状的辣椒上分离到病毒分离物YN57和YN65, DNA-A全序列分析表明,YN57和YN65 DNA-A全长均为2748 nts,具有典型的双生病毒科(Geminiviridae)基因组DNA-A结构特征,共编码6个ORFs,其中病毒链编码AVI (CP)和AV2共2个ORFs,互补链编码AC1、AC2、AC3和AC4共4个ORFs;利用BLAST程序对DNA-A进行分析表明,YN57 DNA-A和YN65 DNA-A均与云南赛葵黄脉病毒(Malvastrum yellow vein Yunnan virus, MYVYNV) Y160分离物(AJ786711.1)的相似性最高,分别为82.5%和82.4%,与中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV) Y194分离物(AJ971265.1)次之,分别为79.7%和79.8%,而与其它双生病毒的相似性在79.7%以下,表明YN57和YN65是双生病毒的一个新种,暂命名为中国辣椒黄化曲叶病毒(Pepper yellow leaf curl China virus, PYLCCNV); RDP序列重组分析表明YN65 DNA-A是由MYVYNV-160和TYLCCNV-Y194重组产生；利用双生病毒卫星DNAβ的通用引物beta01/beta02,从YN57和YN65中均能扩增到DNAβ分子；序列分析表明,YN57 DNAP和YN65 DNAβ均与卫星MYVYNB (MYVYNV伴随的]ONAβ)相似性最高,在97.0%～99.1%之间,表明巧家辣椒上分离到的PYLCCNV伴随异源卫星分子MYVYNB.从陕西泾阳地区的番茄上采集到73份表现矮化、黄化和曲叶症状的番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl disease, TYLCD)样品,利用双生病毒简并引物PA/PB和番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)的通用引物TYT-F/TYT-R进行PCR扩增,共有70个样品检测呈阳性；利用双生病毒DNA-B及卫星DNA的通用引物,未扩增到相应目标条带；随机选取样品SX8,利用滚环扩增PCRCRCA-PCR)、克隆及测序等技术获得病毒DNA-A的全基因组序列,该DNA-A分子全长2781 nts(JN412854.1),与来自山东番茄的TYLCV-SD2(GU199587.1)的核苷酸序列相似性最高,为99.9%；系统进化分析发现,该病毒分离物与我国已报道的TYLCV各分离物亲缘关系较近。这些结果表明,陕西番茄黄化曲叶病是由TYLCV侵染引起,该病毒可能来源于我国山东番茄上的TYLCV。为了明确云南巧家及四川米易赛葵上的双生病毒种类及复合侵染情况,基于RCA-PCR技术,利用双生病毒DNA-A、DNA-B及卫星DNA的通用引物对31个表现黄脉症状的赛葵样品进行了针对WTG的检测,从中分离到MYVYNV、TYLCCNV、MYVV等3种病毒,其中得到的4个MYVYNV分离物均与MYVYNV-Y160相似性最高,在99.3%-99.7%之间,得到的2个TYLCCNV分离物均与TYLCCNV-Y194相似性最高,分别为99.2%和99.7%,得到的1个MYVV分离物与MYVV-Y206相似性最高,为99.2%。DNAβ检测结果显示,除YN86外,25个对WTG检测呈阳性的样品均伴随有DNAβ分子,序列分析表明这些DNAβ分子可分为两类,分别与MYVYNB-Y160 (98.4%～98.7%)和MYVB-Y197 (98.5%～98.7%)的序列相似性最高；未扩增到DNA-B组分及DNAα分子。复合侵染检测结果表明,巧家及米易地区赛葵上的复合侵染率分别为78.57%和72.72%。这些结果表明赛葵样品中双生病毒复合侵染严重,病毒DNA-A与卫星DNAβ以病害复合体形式存在,且卫星DNAβ可伴随异源辅助病毒。