目的:二至丸是经典滋阴补肾方剂,由酒女贞子、墨旱莲药材组成,现临床多加味治疗各种疾病。而中药配方颗粒是单味饮片提取制成的,供临床配方用的颗粒。其没有传统汤剂中,多味药君臣佐使共同配伍反应,不确定其化学成分及药效作用是否保持不变。本实验以经典二味方剂二至丸为研究对象,进行配方颗粒汤剂与传统汤剂化学成分及药效作用比较研究。采用薄层鉴别、特征成分含量测定等分析方法,建立酒女贞子、墨旱莲配方颗粒质量评价方法,为其质量标准建立提供参考。考察建立二至汤特征指纹图谱,对比研究二至汤配方颗粒汤剂与其传统汤剂间的化学成分变化。考察建立大鼠肾阴虚动物模型,进行二至汤及其配方颗粒汤剂给药,考察配方颗粒汤剂改善肾阴虚作用的药效变化。方法:1、酒女贞子、墨旱莲配方颗粒质量分析方法建立参考2015版《中国药典》及相关文献,按照"0502薄层色谱方法",对供试品溶液制备、点样量、展开剂系统、温湿度、不同厂家薄层板等进行细致的考察,建立酒女贞子和墨旱莲配方颗粒薄层鉴别方法。采用高效液相色谱分析方法,优化考察色谱柱、流动相、洗脱程序、柱温、流速、进样量等色谱条件,考察优选最佳供试品溶液制备溶剂种类、提取方式,提取时间及料液比,采用外标法,测定酒女贞子配方颗粒中特女贞苷及墨旱莲配方颗粒中蟛蜞菊内酯含量,进行方法学考察验证方法准确性。2、二至丸化学成分定性定量分析采用高效液相色谱分析方法,优化考察色谱柱、流动相、洗脱梯度、柱温、流速、进样量等色谱条件,建立二至汤特征指纹图谱,分析对比特女贞苷与蟛蜞菊内酯等主要化学成分含量,比较二至丸配方颗粒汤剂与传统汤剂间化学成分种类和含量变化。3、二至丸配方颗粒汤剂与传统汤剂改善肾阴虚作用的药效比较研究首先对肾阴虚动物模型造模药物剂量及造模时间进行考察,确定大鼠肾阴虚动物模型的合适造模剂量及时间。造模考察成功后,进行多组造模,并同时给予二至汤及其配方颗粒汤剂不同剂量给药,实验过程中观察动物体征变化,记录计算大鼠体重、饮食饮水变化。实验结束后麻醉处死大鼠,取血取脏器,进行血清及肝脏指标测定,比较脏器指数及组织病理变化,分析不同剂型给药改善肾阴虚作用的药效强弱变化。结果:1、建立了酒女贞子、墨旱莲配方颗粒薄层鉴别方法,供试品溶液、对照药材及对照品在色谱图对应位置显相同颜色的斑点,斑点分离清晰。所建立的薄层鉴别方法简单方便、耐用性强,较好的适应于酒女贞子、墨旱莲配方颗粒薄层定性鉴别。2、6批酒女贞子配方颗粒中特女贞苷含量测定结果为0.271～0.609%,相差较大。7批墨旱莲配方颗粒中蟛蜞菊内酯含量测定结果为0.002～0.005%。方法学考察精密度、准确性、重复性、稳定性等,均符合含量测定要求。3、二至丸化学成分定性定量分析:所建立的二至汤特征指纹图谱,各色谱峰间分离较佳,能较为全面而整体的呈现二至汤化学成分信息,成功匹配了特女贞苷、女贞苷、蒙花苷成分。二至汤配方颗粒汤剂对比传统汤剂,化学成分种类没有明显差异。基于平均峰面积去衡量含量变化,在选定的28个特征峰中,发现峰7、峰11、峰26和特女贞苷成分含量明显升高,峰28成分含量是传统汤剂中含量的近3倍,峰9、峰24、峰25和蒙花苷成分含量稍微升高;峰1、2、3和峰14及女贞苷成分含量明显降低,峰5、峰15、峰20及蟛蜞菊内酯成分含量对比传统汤剂减少的更加明显;峰19成分含量稍微降低,其余成分含量基本不变。4、本研究成功建立大鼠肾阴虚模型。模型组大鼠出现体重明显下降、大便干结、毛发枯槁易脱落、精神萎靡自主活能力差等体征,T/E2比值减小,抗氧化酶活力增强,肝组织中MDA含量增多,大鼠脏器指数升高、脏器出现组织病理变化等,均提示肾阴虚模型造模成功。设计二至丸配方颗粒汤剂与传统汤剂不同剂量给药,结果发现两种剂型给药对应浓度的中、高剂量给药,整体上均能改善上述肾阴虚症状,且成剂量正相关性。不同剂型给药间改善肾阴虚作用的药效强弱未表现出明显差异,结果显示二至丸配方颗粒汤剂与传统汤剂改善肾阴虚作用药效相近。结论:本实验所建立的酒女贞子、墨旱莲薄层鉴别方法及含量测定方法,简便快速、耐用性良好,适用于酒女贞子及墨旱莲配方颗粒质量控制,可以做为酒女贞子、墨旱莲配方颗粒质量标准建立的参考方法。建立的二至汤特征指纹图谱,各色谱分离较佳,共选定了28个特征峰,较为全面而整体的呈现了二至汤化学成分信息,初步分析对比出了二至汤配方颗粒汤剂与传统汤剂间化学成分变化。成功建立了大鼠肾阴虚模型,通过设计二至汤配方颗粒汤剂与传统汤剂相同剂量给药,分析比较两种剂型给药改善肾阴虚作用的药效强弱。根据实验结果,可初步判断二至汤配方颗粒汤剂对比传统汤剂给药,改善肾阴虚作用的药效无明显差异。