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酒精滥用酒精依赖是当下越发严重的世界性公共卫生问题,长期过量饮酒所导致的酒精性肝病是一种严重危害人类身体健康及生命的疾病。由于社会经济的蓬勃生机,人民的生活质量节节升高,致使我国酒精性肝病的发病率亦呈现逐年上升势头。在一些地区继病毒性肝炎之后,酒精已经成为诱发肝脏损伤的第二大病因。深入研究酒精性肝损伤的发病机制,积极开发经济高效保肝中药,具有深远的意义和广阔的前景。原代肝细胞在肝脏的基础实验研究中有重要作用,通过改良分离及培养方法来获取大量活力好和功能强的肝细胞是本课题研究的重要基础。谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)作为Ⅱ相药物代谢酶GSTs家族的一个亚型,是机体抗氧化损伤系统的重要成员,能够催化外源性化学物发生反应进而在细胞内分解排泄从而来保护机体。课题组前期试验成功制备小鼠急性酒精性肝损伤模型,并在此基础上研究GSTA1在急性肝损伤时变化情况,为GSTA1作为肝损伤标记物提供理论依据。本试验建立体外酒精性肝细胞损伤模型,继续研究GSTA1在体外肝细胞损伤时变化情况,进一步为GSTA1作为肝损伤诊断指标提供依据。此外,以体外肝细胞损伤模型和小鼠急性肝损伤模型为基础,探讨龙葵对酒精性肝损伤的保护作用,为龙葵的开发利用奠定基础。本试验选用雄性昆明小鼠为试验动物,以改良的Seglen原位二步灌流法建立原代肝细胞分离培养技术。根据ALT、AST、MDA、SOD以及GSH各项指标选取酒精诱导损伤的最佳浓度和最佳时间,建立体外酒精性肝细胞损伤模型。同时进行GSTA1剂量-效应试验和时间-效应试验,将GSTA1含量变化与ALT、AST活性变化进行比较分析。GSTA1含量采用ELISA法进行检测。在体外酒精性肝细胞损伤模型基础上,结合ALT、AST、MDA、SOD、GSHGSTA1各项指标综合评价分析龙葵保肝作用。复制小鼠急性酒精性肝损伤模型,以ALT、AST、MDA、SOD、GSH、GSH-Px、GSTA1各项指标及病理组织切片探讨分析龙葵的保肝作用。研究结果表明：1.以Seglen原位二步灌流法为基础建立改良原位二步灌流法,成功分离得到活率85%以上的小鼠肝细胞,单只小鼠分离得到的肝细胞数在(1.4×107)～(2.2x107)之间。2.以100mmol.L-1酒精,作用8h可成功制备原代小鼠肝细胞损伤模型。肝细胞损伤程度与酒精浓度及作用时间成正比,与对照组比较,肝细胞培养上清ALT、AST活性极显著升高(P<0.01),肝细胞内MDA含量极显著升高(P<0.01)、SOD和GSH活性极显著降低(P<0.01)。3.GSTA1含量变化与酒精浓度和作用时间成正比。量效试验：酒精浓度从50mmol·L-1开始,GSTA1含量极显著升高(p<0.01), ALT、AST在75mmol·L-1显著性升高(p<0.05),在100mmol·L1及以上时极显著升高(p<0.01)；时效试验：作用时间从2h开始,GSTA1含量极显著升高(p<0.01),ALT、AST在6h显著性升高(p<0.05),在8h时极显著升高(p<0.01)。以上提示GSTA1比ALT和AST更加灵敏。4.龙葵对酒精诱导原代肝细胞损伤保护作用的试验中,与模型组相比,龙葵高剂量组(100μg·mL-1) ALT、AST舌性及MDA含量显著降低(P<0.05)、SOD、GSH活性显著升高(P<0.05),GSTA1含量极显著降低(p<0.01)；龙葵中剂量组(75μg·mL-1) GSTA1含量显著降低(p<0.05)。5.龙葵对酒精诱导小鼠急性肝损伤保护作用的试验中,与模型组比较,龙葵高剂量组(200mg·kg-1) ALT、AST、GSTA1以及MDA极显著降低(p<0.01),SOD、GSH、GSH-Px极显著升高(p<0.01);龙葵中剂量组(150mg.kg-1)ALT、AST、GSTA1极显著降低(p<0.01),MDA显著降低(p<0.05),SOD、GSH、GSH-Px,显著升高(P<0.05)。本试验成功分离小鼠原代肝细胞,建立稳定的小鼠酒精性原代肝细胞损伤模型。在此基础上GSTAl含量变化在酒精浓度较低及作用早期就可检出,比ALT及AST更加敏感,提示GSTAl可作为肝损伤的早期诊断指标。龙葵对酒精诱导的原代肝细胞损伤及小鼠急性肝损伤中均起保护作用,提示龙葵可能有清除自由基,对抗氧化应激的作用。