乳酸菌制剂作为抗生素潜在替代品之一,无论是作为直接饲喂微生物还是用于发酵饲料均具有较好的应用效果。在动物生产上乳酸菌制剂应用效果的发挥与菌株同源性、益生功能、抗胁迫生长能力及应用方式等因素密切相关,而优良乳酸菌的分离筛选是菌制剂生产研究的基础。本研究以贵南黑藏羊及西藏绒山羊瘤胃内容物为菌株分离材料,通过MRS-Ca CO3琼脂培养基、形态学观察、生理生化试验及16S r RNA基因分子鉴定乳酸菌种属。采用体外试验法对分离鉴定的乳酸菌进行产酸产气试验筛选获得同型发酵乳酸菌,并对其生长速率、产酸能力、对酸和胆盐耐受性能、对常见致病菌的抑菌能力、自凝集率及抗生素敏感性进行了探究,筛选出生长及产酸能力强、又具有良好益生性能和抗逆性能的不同同属同型发酵乳酸菌。最后采用冷冻干燥技术对筛选获得的优良乳酸菌分别添加三种复合保护剂进行菌剂制备研究,探究添加不同保护剂对乳酸菌冻干后存活率的影响,同时不同保护剂、不同保藏温度对乳酸菌制剂在保藏过程中存活率的影响进行了研究,旨在得到适合戊糖片球菌、海氏肠球菌、戊糖乳杆菌三种乳酸菌制剂制备及保藏的最佳保护剂及保藏温度。试验结果如下:（1）从贵南黑藏羊及西藏绒山羊瘤胃内容物中分离鉴定获得25株乳酸菌包括8株戊糖片球菌、6株戊糖乳杆菌、3株蒙氏肠球菌、3株海氏肠球菌、2株粪肠球菌、2株短乳杆菌、1株明串珠菌,其中8株戊糖片球菌和2株短乳杆菌均分离自黑藏羊瘤胃内容物,明串株菌分离自绒山羊瘤胃内容物,黑藏羊和绒山羊瘤胃内容物中均分离出戊糖乳杆菌、粪肠球菌、海氏肠球菌、蒙氏肠球菌。（2）通过对筛选确定的22株同型发酵乳酸菌进行不同生物学特性分析,分别在片球菌属、肠球菌属、乳杆菌属中筛选获得2株戊糖片球菌、1株海氏肠球菌、2株戊糖乳杆菌,2株戊糖片球菌均在4 h后进入对数生长期、16 h达到稳定期,24 h后菌液p H达到4.0以下,能耐受p H 3.0和0.3%的胆盐环境;1株海氏肠球菌在2 h后进入对数生长期、12 h达到稳定期,24 h后p H达到4.5以下,能耐受p H 4.0和0.3%的胆盐环境;2株戊糖乳杆菌均在2 h后进入对数生长期、16 h达到稳定期,16 h后p H达到4.0以下,能耐受p H 3.0和0.3%的胆盐环境,5株乳酸菌在自凝集率、对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果及安全性方面均表现优良。（3）运用冷冻干燥技术制备戊糖片球菌、海氏肠球菌、戊糖乳杆菌菌制剂时不同保护剂的添加对冻干后存活率存在显著差异（P<0.05）,本研究中保护剂配方为脱脂乳12%、海藻糖1%、谷氨酸钠1%、甘油3%对三种乳酸菌的冻干效果均较好;添加此保护剂配方、-80℃保藏温度对三种乳酸菌制剂的保藏效果最好,存活率最高。本试验结果表明不同地域不同品种羊瘤胃中乳酸菌种类不同,且乳酸菌体外生物学特性存在差异,表现良好的菌株可作为菌剂制备菌种,不同乳酸菌制剂制备时最佳保护剂不同,保藏温度相较于-20℃和常温,-80℃条件下保藏效果最好。