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上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）起源于人卵巢表面上皮。EOC约占卵巢所有恶性肿瘤的90%,其发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌,位居第三位。但在所有的妇科恶性肿瘤中致死率却占第一位,五年生存率仅40%左右。目前为止,卵巢癌恶性进展机制尚未完全阐明。钙粘蛋白（Cadherin）是一组Ca2+依赖性跨膜糖蛋白,上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）是Cadherin家族中的主要成员,在极化上皮细胞之间的粘附过程中有主要作用。研究表明,作为肿瘤转移抑制分子,E-cadherin表达降低可以启动Wnt/β-catenin通路信号转导系统,使细胞浆内游离β-catenin水平升高,β-catenin进入细胞核,与核内转录因子T细胞因子/淋巴细胞增强因子（T cell factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）家族成员结合,激活下游靶基因的表达,如C-myc、Cyclin-D1。这些靶基因可以做为转录调节因子,进一步调控其它基因的表达引起细胞增殖异常,最终致使细胞癌变以及肿瘤细胞的扩散转移。因此,E-cadherin基因（CDH1）的异常变异所致的基因表达异常可能与肿瘤的发生和发展密切相关。在本研究中我们探讨了CDH1启动子区-160C/A、-347G/GA和3’UTR+54C/T遗传性多态位点与EOC患者临床预后的相关性,并进一步研究了E-cadherin及Wnt信号通路中的β-catenin、C-myc和Cyclin-D1基因转录水平和蛋白水平与EOC患者临床预后的关联。为探讨卵巢癌的发展机制提供了新思路。第一部分CDH1 SNP多态性与EOC患者临床预后相关性目的:探讨CDH1基因启动子区-160C/A、-347G/GA和3’UTR+54C/T遗传性多态位点与上皮性卵巢癌患者临床预后的相关性。方法:1.研究对象:自2002年1月至2011年5月在河北医科大学第四医院妇科行开腹手术治疗的患者共257例,术后标本经河北医科大学第四医院病理科证实为上皮性卵巢癌。全部病例均达到3年随访,其中153例达到5年随访时间。2.采用聚合酶链反应检测了全部上皮性卵巢癌患者CDH1基因启动子区-160C/A、-347G/GA和3’UTR+54C/T遗传性多态位点的基因型频率分布。3.统计学处理。采用卡方检验比较基因型频率观察值和预期值;对照组基因型频率进行Hardy-Weinberg平衡分析;生存分析采用Kaplan-Meier模型和Cox比例风险模型评估各SNPs基因型与患者复发和死亡的风险。P<0.05定义为差异具有统计学意义。结果:1.257例患者CDH1-347G/GA、-160C/A、3’UTR+54C/T三个多态位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。2.K-M生存分析结果显示,携带G/G,G/GA和GA/GA基因型的患者中位无进展生存期（PFS）时间分别是9、20和5个月;中位总生存时间（OS）时间分别是31、48和18个月。与携带G/G基因型的EOC患者相比较,携带GA/GA基因型的患者中位PFS和OS时间更短（P<0.01）;Cox多因素回归显示,调整预后因素后,比较携带G/G基因型的患者,携带GA/GA基因型的EOC患者有较高的疾病复发风险和死亡风险。3.K-M分析结果及Cox多因素回归显示,相对于携带CDH1-160 C/C基因型的病人,携带A/A基因型的EOC患者有明显缩短的PFS时间,统计学差异显著。结论:CDH1-347 GA/GA和-160 A/A多态性与EOC患者预后相关。CDH1-347 GA/GA和-160 A/A多态性可能作为上皮性卵巢癌患者临床预后的生物标志物。第二部分CDH1遗传变异所致的表达改变与EOC患者临床预后的关系目的:1.探讨CDH1基因启动子区多态性与其表达的关系;2.明确E-cadherin mRNA和蛋白表达与EOC患者临床预后的关系。方法:1.研究对象:选取115例自2013年1月至2018年1月在河北医科大学第四医院妇科初次行手术治疗的EOC患者癌组织,以及同期在本院因非肿瘤因素行手术治疗的60例正常卵巢组织。2.采用实时定量PCR（Real-time PCR）检测全部上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中的CDH1 mRNA表达情况。3.对其中75例随访时间达到60个月的EOC患者进行基因分型,同时应用免疫组化S-P法检测上皮性卵巢癌组织中E-cadherin蛋白表达情况。4.统计学处理。采用Mann-Whitney U检验,比较癌组织与对照组正常卵巢组织以及早期癌、晚期癌组织中CDH1 mRNA表达差异;生存分析采用Kaplan-Meier模型和Cox比例风险模型评估CDH1 mRNA和E-cadherin蛋白的不同表达与患者复发和死亡的风险。采用相关性分析分别计算各位点SNPs基因型与CDH1 mRNA以及CDH1 mRNA与E-cadherin蛋白表达的相关系数。采用Kruskal-Wallis H检验比较不同位点SNPs基因型患者CDH1 mRNA表达的差异,对整体检验有差异的SNPs基因型,进行两两成对比较,成对比较显著性以Bonferroni进行调整。P<0.05定义为差异具有统计学意义。结果:1.EOC患者癌组织CDH1 mRNA的表达明显低于对照组正常卵巢组织（P<0.01）。分层分析显示早期卵巢癌组织CDH1 mRNA水平明显高于晚期卵巢癌组织（P<0.01）。2.K-M分析显示,CDH1 mRNA高表达组、低表达组患者的中位PFS、OS分别为38、12、38和21个月,以上组间皆有明显的统计学差异（P<0.01）。Cox回归显示在调整混杂因素后,相对于CDH1 mRNA高表达组,低表达组复发和死亡风险明显增加。相关分析显示,CDH1启动子区-347G/GA和-160C/A多态与CDH1mRNA的表达明显相关（P<0.01）。Kruskal-Wallis H检验成对比较显示,相对于CDH1-347G/G基因型,GA/GA基因型的EOC组织中mRNA的表达明显降低(PAdj<0.01);相对于CDH1-160 C/C基因型,A/A基因型的EOC组织中mRNA的表达明显降低(PAdj=0.04)。3.K-M分析显示,E-cadherin蛋白阴性表达、低表达、高表达组中,患者中位PFS分别为2、17和32个月,中位OS分别为3、26和36个月,以上皆有明显的统计学差异（P<0.01）;Cox回归显示,在调整混杂因素后,相对于E-cadherin蛋白高表达,低表达和阴性表达E-cadherin蛋白患者复发风险明显增加,死亡风险明显增加。4.相关分析显示上皮性卵巢癌组织CDH1 mRNA表达水平与E-cadherin蛋白表达水平明显相关（P<0.01）。结论:1.卵巢癌组织中CDH1 mRNA表达水平低于正常卵巢组织,晚期癌组织中CDH1 mRNA表达水平明显低于早期癌组织。2.CDH1 mRNA低表达是EOC患者预后不良的风险因素。CDH1-160A/A和-347 GA/GA遗传多态性与卵巢癌组织中CDH1 mRNA表达明显相关。3.E-cadherin蛋白低表达是EOC患者预后不良的风险因素。CDH1mRNA表达与E-cadherin蛋白表达相关。第三部分Wnt/β-catenin信号通路中相关基因表达与EOC患者临床预后的关系目的:探讨Wnt信号通路中β-catenin、C-myc和Cyclin-D1表达水平与EOC患者预后的关系。方法:1.研究对象:选取75例自2013年1月至2018年1月在河北医科大学第四医院妇科初次行手术治疗的EOC患者的癌组织。2.采用Real-time PCR检测75例EOC患者癌组织中β-catenin、C-myc和Cyclin-D1 mRNA的表达情况。3.采用免疫组化S-P法检测75例上皮性卵巢癌组织中β-catenin、C-myc和Cyclin-D1蛋白表达情况。4.统计学处理。生存分析采用Kaplan Meier模型,Log-rank检验比较β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA及其蛋白的不同表达与EOC患者临床预后之间的差异。采用Cox比例风险模型估计β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA及其蛋白的不同表达与EOC患者复发和死亡的风险。采用相关性分析分别计算E-cadherin蛋白表达与β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA表达及β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA表达与其蛋白水平的相关系数。P<0.05定义为差异具有统计学意义。结果:1.K-M生存分析结果表明,β-catenin mRNA低表达的患者中位PFS和OS分别为25和33个月,高表达的患者中位PFS和OS分别为12和27个月,两者相比都具有明显差异（P<0.01）;Cox多因素回归显示,在调整混杂因素后,相对于β-catenin mRNA低表达的患者,高表达患者复发、死亡风险明显增加;K-M生存分析结果表明,C-myc mRNA低表达的患者中位PFS和OS分别为30和34个月,高表达的患者中位PFS和OS分别为17和25个月,二者皆存在明显差异（P<0.01）;Cox多因素回归显示,在调整混杂因素后,相对于C-myc mRNA低表达的患者,高表达的患者死亡风险明显增加;K-M生存分析结果表明,Cyclin-D1 mRNA低表达的患者中位PFS和OS分别为33和36个月,高表达的患者中位PFS和OS分别17和26个月（P<0.01）;相对于Cyclin-D1 mRNA低表达的患者,高表达的患者死亡风险明显增加。2.相关分析显示,E-cadherin蛋白表达与Wnt通路β-catenin、C-myc、Cyclin-D1mRNA相关（P<0.01）。3.K-M生存分析显示β-catenin蛋白高表达、低表达、阴性表达患者PFS分别为15、26和大于32个月,OS分别为20、29和大于36个月,存在显著统计学差异;在调整混杂因素后,相对于β-catenin蛋白阴性表达患者,β-catenin蛋白高表达的患者复发、死亡风险明显增加。K-M分析显示C-myc蛋白高表达、低表达、阴性表达患者PFS分别为11、23和32个月,OS分别为21、28和35个月,存在显著统计学差异;在调整混杂因素后,相对于C-myc蛋白阴性表达患者,C-myc蛋白高表达的患者复发、死亡风险明显增加。K-M分析显示Cyclin-D1蛋白高表达、低表达、阴性表达患者PFS分别为8、29和32个月,OS分别为20、29和36个月,存在显著统计学差异;在调整混杂因素后,相对于Cyclin-D1蛋白阴性表达患者,Cyclin-D1蛋白高表达的患者复发、死亡风险明显增加。4.相关分析显示上皮性卵巢癌组织β-catenin、C-myc、Cyclin-D1mRNA各自与其蛋白表达明显相关（P<0.01）。结论:1.Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA表达与EOC患者预后相关。β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA高表达是EOC患者预后不良的风险因素。2.E-cadherin蛋白表达与β-catenin、C-myc、Cyclin-D1 mRNA表达相关。β-catenin、C-myc、Cyclin-D1蛋白表达与EOC患者预后相关。三者蛋白高表达可能是EOC患者预后不良的风险因素。3.β-catenin、C-myc、Cyclin-D1基因mRNA表达与分别与其蛋白表达相关。4.综上所述,我们认为CDH1-347 GA/G和-160 C/A多态性可能通过影响CDH1转录水平进而影响CDH1蛋白的表达,从而调节下游Wnt通路相关基因表达进而影响EOC患者预后。