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猪囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)是严重危害畜牧业生产和人类健康的人畜共患寄生虫病。猪带绦虫的生活史由成虫、六钩蚴和囊尾蚴三个发育阶段组成，六钩蚴是囊尾蚴的早期发育阶段，在入侵宿主及引起机体免疫学反应等方面扮演重要角色。本研究避开庞大的基因组DNA，以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为切入点，从中筛选、克隆免疫原基因，并进行表达和功能分析。结果表明： 1．利用质粒表达载体pSPORT 1首次成功构建了猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库。经测定，库容量达5×10~6，重组率100％，用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10KD基因、18KD基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本，说明文库质量高，代表性强。 2．建立了筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术方法。应用该法成功地筛选和克隆到Ts01、Ts02、Ts03基因，其完整阅读框架(ORF)分别为393bp、1191bp和1818bp。其中将Ts01基因登录到GenBank，登录号为AY327451，经BLAST网站软件分析，证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的一个新基因。实验表明，免疫学筛选基因的方法特异性强，灵敏度高，能快速地筛选大肠杆菌质粒表达文库，有利于大规模开展原创性研究。 3．用pGEX-4T-1表达载体和BL21寄主菌高效表达了Ts01基因的融合蛋白，并证实了该蛋白的免疫活性和稳定性。设计表达型特异性引物，将Ts01基因，亚克隆到pGEX-4T-1表达载体，构建pGEX-GST-Ts01的融合表达的重组载体，转化BL21寄主菌，IPTG诱导表达后，经SDS-PAGE和Western蛋白分析，证实成功地获得了约40kD左右的融合蛋白质，与预测的分子量大小一致，表达量达到40％左右，具有免疫学活性，而且表达的产物呈可溶性，未形成包涵体，这与用蛋白质软件分析预测的Ts01编码蛋白为水溶性相一致。 4．利用生物信息学技术预测了Ts01基因及其编码蛋白的结构，为其功能研究鉴定了基础。TS01编码蛋白主要由谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)、缬氨酸(V)等组成，含量高达8.5～16.9％；而脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)和酪氨酸(Y)含量较少，在0.8～5.4％之间；另外，不含色氨酸(W)。Ts01编码蛋白的结构与特性主要有：(1)TS01蛋白主要由α螺旋组成，占63.85％，β折叠很少仅占6.92％，除两个氨基酸的β折叠外，其余都集中在蛋白的后末端，经预测该蛋白具有亲水性(可能性为75.38％)，是一个可溶性的非球形的蛋白质；(2)对蛋白结构特征分析，该蛋白无N端信号肽，C端包埋在分子的内部结构中，在第24位氨基酸与第25位氨基酸之间有一个蛋白酶位点，在第43位氨基酸开始有一个C2H2 type的锌指结构(CLACRLNFTNKSDYQVHRRLDH)的DNA结合位点；(3)对蛋白质转译后加工修饰预测，在氨基酸第2、54、68、69位有O-连糖基化位点，在第56位有一个酪氨酸的磷酸化位点，在68位有一丝氨酸的磷酸化位点。