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目的放射治疗与内分泌治疗都是乳腺癌术后治疗的重要手段。而放疗与内分泌治疗的最佳配合模式至今无一个肯定的结论,两者应该如何联合才能发挥最大的疗效?本研究的目的在于通过Meta分析及基础实验分析放疗不同时序联合内分泌治疗的差异及内在机制。方法1.通过对2000到2014年发表的关于乳腺癌放疗同步对比序贯内分泌治疗的相关临床研究报道文献,分析放疗相关毒性反应(包括2级以上皮肤反应、放射性肺炎、放射性肺纤维化)及生存数据(包括局部复发、远处转移、5年生存率和10年生存率)的差异。2.通过体外实验研究放疗与氟维司群的联合时序,实验对象为乳腺癌ER阳性MCF-7细胞;实验分组:空白组(C)、单纯加药组(F)、单纯照射组(R)、照射前加氟维司群组(F+R)、照射后加氟维司群组(R+F)。通过克隆形成、Transwell、流式细胞术、western blot分别检测各组细胞的增殖、侵袭能力、凋亡、细胞周期分布及PI3K/Akt通路活性变化、ER-a、PCNA、MMP-2蛋白表达差异。然后通过LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,再行上述实验,检测在各组细胞的增殖、侵袭、周期、凋亡及各蛋白表达的差异,明确PI3K/Akt通路活性对乳腺癌在放疗、内分泌治疗发挥的作用。结果1.通过对相关临床研究文献进行Meta分析发现,对于早期乳腺癌术后放疗,放疗同步对比序贯内分泌治疗,在放疗相关毒性反应(皮肤反应、放射性肺炎、放射性肺纤维化)及生存相关数据(局部复发率、远处转移率、5年总生存率、10年总生存率)均无差异;分层分析显示不同内分泌药物,即他莫昔芬和芳香化酶抑制剂,未发现两种药物在不同组间对放疗相关毒性反应及生存数据上有差异。2.1 1)克隆形成:克隆形成实验结果显示氟维司群联合照射组(F+R,R+F)细胞存活曲线均比单纯照射组(R)明显下移,各剂量点的存活分数均低于单纯照射组。另外,放疗不同时序联合氟维司群,在6Gy以前,照射前加氟维司群组的存活曲线高于照射后加氟维司群组,在6Gy以后则随着剂量的增高,低于照射后后加氟维司群组。2)Transwell:MCF-7细胞加氟维司群或照射后,与空白组比较,穿过基质胶的乳腺癌细胞数量明显增多,氟维司群联合射线组穿出的细胞则更多,F+Rvs R+F穿出细胞量有统计学差异,P=0.029,R+F穿出细胞量高于F+R,即放疗序贯氟维司群组细胞侵袭能力高于同步组。3)凋亡:不同预处理方式对细胞的凋亡率存在影响,加氟维司群、照射后细胞的凋亡率增加,氟维司群联合照射组(F+R、R+F)细胞凋亡率显著增加,其中放射序贯氟维司群组(R+F)细胞的凋亡率最高;两两比较分析,C vs R+F、R vs R+F、F+R vs R+F 均有显著差异,P<0.05。4)细胞周期:在氟维司群组、照射组、氟维司群+照射组、照射+氟维司群组,G1、G2/M期均较空白组升高,S期均降低,与空白组比较均有统计学差异,P<0.05;F+R vs R+F在各细胞周期比例比较无统计学差异。5)Western Blot:放射联合氟维司群组(F+R、R+F)的PI3K/Akt信号通路关键蛋白总Akt、p-Akt473和p-Akt 308均较空白组表达减弱,Akt及p-Akt308的表达在单纯放射组增加,考虑为照射后Akt活化所致;ER-α的表达在所有含氟维司群组均减弱,尤其是放射同步氟维司群组,;PCNA蛋白表达在放疗联合氟维司群组减弱;MMP-2蛋白表达在F组、R组、F+R组、R+F组均较C组升高,与Transwell结果的趋势一致。2.2 1)阻断PI3K/Akt信号通路,克隆形成:氟维司群联合照射组(F+R,R+F)生存曲线高于单纯照射组(R),各剂量点的存活分数均高于单纯照射组;阻断PI3K/Akt信号通路前、后对比,单纯照射组的MCF-7细胞生存曲线最高,单纯照射组的MCF-7/PI3K阻断细胞的生存曲线最低,其余各组介于两组的中间。2)Transwell:MCF-7/PI3K阻断细胞加氟维司群或照射及两者联合后,与空白对照组比较,穿过基质胶的乳腺癌细胞明显减少,空白组和其余四组穿出细胞数比较均有统计学差异,P<0.05,R+F vs F+R无统计学差异;与PI3K/Akt信号通路未阻断组对比,空白组及预处理组的侵袭能力均减弱,尤其是预处理组显著降低。3)凋亡:不同方式预处理MCF7/PI3K阻断细胞对细胞的凋亡率影响未见差异,两两比较未见统计学差异,P>0.05;所有预处理组的凋亡率均较PI3K未阻断组显著降低。4)细胞周期:各预处理组相比空白组都发生了 G1、G2/M期阻滞,空白组和其他四组在G1、G2/M、S期两两比较均有统计学差异,P<0.05;PI3K/Akt信号通路阻断前、后各预处理均较空白组G1、G2/M期延长,S期缩短,放疗同步对比序贯氟维司群在G1、G2/M、S期比例无统计学差异。5)WesternBlot:ER-α蛋白的表达在含氟维司群的组中均下调,尤其是放射联合氟维司群组(F+R、R+F),PCNA的表达在R+F组最低,MMP-2的表达在各组之间对比无差异;与PI3K/Akt未阻断各组对比,ER-蛋白的表达在含氟维司群的组的下调较未阻断的相应组明显,PCNA、MMP-2在各组的表达均较未阻断相应组下调,尤其是PI3K/Akt抑制、射线、氟维司群三者联合时。结论1.乳腺癌术后放疗同步内分泌治疗对比放疗序贯内分泌治疗,对晚期毒副反应及乳腺癌患者的生存结局无明显影响;不同内分泌药物他莫昔芬对比芳香化酶抑制剂在不同时间联合放疗未增加或降低乳腺癌放疗相关毒副反应及生存结局;2.氟维司群有放射增敏的作用,随着放射剂量的增加,放射同步氟维司群优于序贯;放射同步氟维司群细胞侵袭能力弱于序贯;3.氟维司群的放射增敏作用与PI3K/Akt通路活性相关,阻断该通路细胞放疗敏感性显著提高;阻断PI3K/Akt通路能够抑制氟维司群、射线及两者联合的MCF-7残存细胞的侵袭能力;4.抑制PI3K/Akt、放疗、氟维司群三者联合能够提高放疗及内分泌治疗疗效、抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭能力。