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利用比较基因组学方法分离基因是一种新颖有效的方法,其基本原理是运用人、小鼠和猪等物种间存在的基因同源性,在基因的保守区设计引物分离基因,国内外学者采用这种方法成功分离了猪的许多新基因。根据比较基因组学的研究,猪SSC 11(sus scrofa chromosome 11)和人HSA 13(Homo sapiens chromosome 13)间存在着很大同源性,人HSA13存在496个基因,估计SSC11至少也有400个基因,截止目前,猪11号染色体上分离、定位的基因不足30个,所以猪SSC11新基因的分离、定位已势在必行。本文成功分离了猪GAS6、POSTN、CDC16和EFNB2等4个新基因,并运用SCHP和IMpRH克隆板将这4个新基因进行了物理定位于SSC11,这对于丰富猪11号染色体的物理图谱和了解不同物种染色体的进化具有重要的理论意义,并为这些基因功能的研究打下良好的基础。 本论文根据比较基因定位信息,分离和物理定位了猪11号染色体上的4个新基因,并对MyoG基因进行了SNP分型研究,取得了如下结果: 1.依据人13号、小鼠8号染色体上的同源基因保守序列设计引物,从宁乡猪和大围子猪基因组中分离了4个新基因的6个片段,并提交GenBank数据库,这6个片段分别是猪GAS6基因内含子9,POSTN基因内含子18,CDC16基因内含子4和内含子8,EFNB2基因3′-UTR和内含子3,GenBank收录号分别为AY880668、AY880669、AY880670、DQ206823、AY880671和DQ206822。 2.用猪×啮齿类体细胞杂种板将4个新分离的猪基因进行染色体区域定位,将GAS6基因、CDC16基因和EFNB2基因定位于SSC 11 q11～q17,定位概率P分别为0.9976、0.9998和1.0000,与该区域标记间的相关系数分别为0.7906、0.8563和0.7802,误差概率P都小于0.1%;将POSTN基因定位子SSC11 p11～15,P=0.9992,与该区域标记间的相关系数为0.7031.P<0.1%。 3.用猪辐射杂种板将4个新分离的猪基因进行染色体精细定位,结果这4个基因均与猪11号染色体上的微卫星标记紧密连锁,GAS6基因与SW1452紧密连锁,LOD=16.88,存留率为22%,在放射杂交图谱上的图距为56 cR;POSTN基因与SW1486紧密连锁,LOD=15.87,存留率为35%,在放射杂交图谱上的图距为67 cR;CDC16基因与SW1452紧密连锁,LOD=16.08,存留率为22%,在放射杂交图谱上的图距为62 cR;EFNB2基因与SW903