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目的：红细胞溶解释放的OxyHb是自发性蛛网膜下腔出血（SAH）后引起脑血管痉挛（CVS）的关键因素。同样缝隙连接（gap junction GJ）蛋白重构与众多心脑血管疾病的发生紧密相关。磷酸化是GJ发生重构的最主要途径之一。本实验是前期研究的延续，研究Cx43及其Ser368和Ser262磷酸化水平在CVS中的表达变化及其信号转导机制；进一步深入研究脑血管GJ通道参与SAH后CVS的分子机制，可能为CVS的药物防治寻找到一个全新的靶点。方法：1、原代培养大鼠基底动脉平滑肌细胞、免疫荧光鉴定，并观察大鼠基底动脉及平滑肌细胞Cx43、Cx40的表达和分布，构建CVS细胞模型：开颅取大鼠基底动脉，组织贴块法培养大鼠基底动脉平滑肌细胞，形态学及免疫荧光鉴定；免疫荧光、共聚焦显微镜观察Cx43、Cx40在大鼠基底动脉及平滑肌细胞的表达和分布；加入10-6M OxyHb孵育平滑肌细胞建立CVS细胞模型。2、激光共聚焦显微镜观察脑血管痉挛细胞模型中加入PKC、MAPK及PTK等抑制剂后P-Cx43-S368、P-Cx43-S262及Cx43表达变化:各试验组分别加入溶媒、OxyHb、OxyHb和PKC抑制剂白屈菜季安碱、OxyHb和MAPK抑制剂PD98059、OxyHb和PTK抑制剂PP2，孵育12、24、48小时，三重免疫荧光着色，共聚焦显微镜观察Cx43、P-Cx43-S368及P-Cx43-S262的表达变化。3、Western blotting分析上述各组P-Cx43-S368、P-Cx43-S262及Cx43蛋白表达时相性变化。结果：1、成功培养出大鼠基底动脉平滑肌细胞，缝隙连接蛋白Cx43、Cx40在基底动脉及平滑肌细胞表达丰富，且在生理状态下Cx40表达量明显多于Cx43；2、基底动脉平滑肌细胞经OxyHb刺激12h、24h、48h后，共聚焦显微镜及Western blotting技术观察到P-Cx43-S368、P-Cx43-S262及Cx43总蛋白表达显著升高，并呈时相性变化(P＜0.05)；3、分别应用PKC抑制剂白屈菜季安碱、MAPK抑制剂PD98059及PTK抑制剂PP2，可显著抑制OxyHb诱导的P-Cx43-S368、P-Cx43-S262及Cx43总蛋白表达升高（P＜0.05）结论：1、生理状态下缝隙连接蛋白Cx43、Cx40在基底动脉及平滑肌细胞丰富表达，且Cx40表达明显多于Cx43；2、OxyHb诱导的CVS细胞模型中,致痉因子可能直接或间接进入局部血管平滑肌细胞，激活细胞内PKC、MAPK、PTK等信号转导途径，升高Cx43总蛋白表达，增强Cx43的Ser368和Ser262磷酸化水平，调节GJ功能，使GJ选择性传输某些电、化学信号，最终诱导弥漫性持续性的CVS发生发展。阻断PKC、MAPK、PTK等信号转导途径可以降低Cx43总蛋白表达，阻断Cx43的Ser368和Ser262过磷酸化，显著缓解OxyHb诱导的CVS，为CVS的有效防治寻找到一个崭新途径。