万古霉素发酵工艺优化

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本文根据万古霉素的合成途径,对东方拟无枝酸菌V-0704(Amycolatopsis orientalisV-0704)发酵生产万古霉素过程进行了的优化。首先对摇瓶培养基进行了优化。应用单因素实验考察了氮源,碳源及其浓度对万古霉素发酵的影响,然后应用两水平实验考察了氮源,碳源中对万古霉素效价提高影响显著的因素,在找到显著因素的基础上,对显著因素进行了响应面实验,在模拟出的曲面上进行了数学优化,从而获得了最佳的培养基配方(g/L):葡萄糖15,麦芽糖20,玉米油15,酵母粉0.568,棉籽饼粉6.98,黄豆饼粉23.3。采用优化后的培养基在摇瓶培养的条件下万古霉素的效价与原培养基相比提高了2倍,平均效价达到了4113U/ml。采用优化后的培养基,用统计学方法进行了摇瓶培养过程补加金属离子的实验。确定了较合适的金属离子的浓度为钴离子浓度:2.486*10-5(g/m1),钼离子浓度:2.486*10-5(g/m1)。对比试验证明添加这两种金属离子后效价平均提高了17%,平均效价达到4946U/ml。在摇瓶实验的基础上,进行了100L罐发酵过程放大实验。应用多尺度参数相关分析方法研究了万古霉素前体乙酸钠、葡萄糖以及金属离子补加策略对发酵过程的影响,确定了最佳生产工艺。在100L发酵罐实验中,发酵周期为120h,平均效价为8500U/ml,与原有工艺相比效价提高了1倍。最后分别建立了能够进行菌体形态分类以及发酵过程预测的多层次的神经网络模型。
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