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花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料作物,在世界农业中享有重要地位。由齐整小核菌(Sclerotium rolfii Sacc.)引起的花生白绢病是我国花生产业中的主要病害之一。病原菌主要以菌丝和菌核在病残体和土壤中越冬,成为翌年田间发病的初侵染源。由于花生白绢病菌培养性状和营养亲和性多样,群体结构复杂,缺乏抗病品种,目前国内外仍以化学防治为主。病原菌生物学和群体特性研究有助于揭示其种群结构、遗传进化和致病机制,为抗病育种、预测预报及综合防治提供理论依据。本研究采集我国5个省区451份花生白绢病病样,分离纯化得到210株菌株,系统开展了病原菌群体表型特性、菌丝营养亲和性、遗传多样性及药剂敏感性研究,旨在为花生白绢病菌的综合防控提供理论依据。主要结果如下:1.花生白绢病菌群体表型特性研究对采自全国不同省区210株花生白绢病菌菌株的菌丝生长速率、产核数量、菌核直径、菌核形成期、菌核成熟期和菌丝营养亲和性进行测定,结果表明:(1)供试菌株菌丝生长速率、产核数量和菌核直径、菌核形成期和菌核成熟期范围分别为0.32~2.56 cm/d、0~120个、0.30~3.28 mm、6~13 d和11~21 d,平均值分别为1.83 cm/d、58.34个、1.40 mm、7.78 d和15.33 d。其中来源于江苏供试菌株菌丝生长速率最快,平均值为1.78 cm/d,来源于河北供试菌株产核数量最多,平均值为73.6个,来源于福建供试菌株菌核直径最大,平均值为1.61 mm,来源于河北供试菌株菌核形成期和成熟期最早,平均值分别为6.40 d和14.6 d。(2)根据聚类分析结果,供试菌株菌丝生长速率化分为4个类型,分别为A1型(生长速率缓慢型,生长速率范围为0~1.0 cm/d)、A2型(生长速率较慢型,生长速率范围为1.0~1.5 cm/d)、A3型(生长速率较快型,生长速率范围为1.5~2.0 cm/d)、A4型(生长速率快型,生长速率>2.0cm/d),菌株数占比分别为34.28%,30.95%,16.19%和18.57%。产核数量分为3个类型,B1型(菌核数量少型,菌核数量范围为0~50个)、B2型(菌核数量中等型,菌核数量范围为50~100个)、B3型(菌核数量多型,菌核数量范围为100~120个),菌株数占比分别为44.76%,37.62%和17.62%。菌核直径划分为4个类型,C1型(无菌核型,菌核直径为0 mm)、C2型(菌核直径小型,菌核直径范围为0~1.5 mm)、C3型(菌核直径大型,菌核直径范围为1.5~2.0)、C4型(菌核直径大型,菌核直径>2.0 mm),菌株数占比分别为0.01%,49.52%,12.38%,37.61%。(3)210株供试菌株共分为22个菌丝营养亲合群(MCGs),MCGs与菌株地理来源具有高度相关性,除了MCG1、MCG4和MCG12外,其它亲和群内供试菌株均来源于同一地区。不同MCGs中包含不同生长速率类型、菌核产生数量类型以及菌核直径类型的菌株,花生白绢病菌表行特征与MCGs不存在明显的相关性。2.花生白绢病菌ISSR-PCR反应体系的建立与优化采用单因素和正交设计建立并优化了花生白绢病菌ISSR-PCR反应体系。反应体系(25μl)为2.0 U Taq DNA聚合酶,2.0 mmol/L Mg2+,0.5 mmol/L dNTPs,1.3μmol/L引物,20 ng模板DNA;筛选出的8条最适ISSR引物及退火温度为UBC809(52.7℃)、UBC810(50.4℃)、UBC812(55.6℃)、UBC834(52.7℃)、UBC842(55.6℃)、UBC844(52.7℃)、UBC880(52.7℃)和UBC881(50.4℃);PCR反应程序为:94℃预变性4 min,94℃变性1 min,退火1 min,72℃延伸1 min,35次循环,72℃延伸10 min。3.花生白绢病菌遗传多样性研究基于优化的花生白绢病菌ISSR反应体系对采自我国5省的102株代表性菌株进行遗传多样性分析,并分析了遗传谱系与病原菌表型特征的关联性。结果表明:8个供试引物共扩增出57个DNA片段,主要分布在300~2000bp区间,其中特征性片段为48条,占总片段数的84.21%。江苏省群体多态性位点最高(43个),河北省群体最低(1个)。我国5省花生白绢病菌群体的Nei’s遗传多样性指数(H)为0.06,香农指数(I)为0.13。遗传多样性指数最高的是江苏群体(H=0.07,I=0.15),河北省群体多样性最低(H=0.01,I=0.01)。在相似系数为0.92时,可将供试菌株分为10个遗传谱系。不同遗传谱系中包含不同的菌丝生长速率类型、产核数量类型及菌核直径类型,供试菌株遗传谱系与菌丝生长速率类型、菌核形成数量类型及菌核直径类型关联度不大。供试菌株遗传谱系与MCGs具有高度相关性,除了遗传谱系1中包含4个菌丝亲和群外,其它遗传谱系均包含1个菌丝亲和群。4.花生白绢病菌对戊唑醇的敏感性测定采用菌丝生长速率法对210株花生白绢病菌供试菌株进行了对戊唑醇的敏感性测定。结果表明:戊唑醇对供试210株花生白绢病菌的EC50平均值为0.1932μg/m L,范围为0.0064~1.1292μg/m L,相差176倍。地区之间花生白绢病菌对戊唑醇的敏感性相差6.05倍。根据野生敏感型病原群体对药剂敏感性呈正态分布的原理,将EC50值0.0630mg·L-1初步定为花生白绢病菌对戊唑醇的敏感基线。利用SPSS软件对供试菌株进行聚类分析,供试菌株共分为3类,不同地理来源的供试菌株出现在不同的聚类组中,供试菌株对戊唑醇的敏感性与地理来源之间不存在明显的相关性。