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目的:树突状细胞(dendritic cells, DCs)能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,处于启动、调控和维持免疫应答的中心环节。它的抗肿瘤特性是近几年来国际上的研究热点。肿瘤微环境是肿瘤细胞增殖和DC行使功能的重要场所。本课题组以前综合研究了肿瘤微环境中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)、转化生长因子-β1(transformed growth factor,TGF-β1)和白介素-10(interleukin-10, IL-10)等多种细胞因子对DCs的生物物理特性和运动能力的影响,尚未对单一细胞因子的作用进行研究。为了更深入地理解DCs的生物学行为和肿瘤的免疫逃逸机制,本研究从生物物理学与免疫学交叉的角度出发,探索VEGF对成熟DCs(mature dendritic cells, mDCs)生物物理特性的影响及其潜在的分子机制。方法:本研究中,第一部分分别用10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml和70ng/ml的VEGF处理mDCs作为实验组,未处理组作为对照。检测了mDCs的细胞电泳率、渗透脆性和粘弹性等生物物理学指标,以及细胞骨架F-actin的形态及表达量、细胞核的形态和大小,部分细胞骨架结合蛋白的结构及表达水平、跨人脐静脉内皮细胞(humen umbilical veinvascular endothelial cells, HUVECs)迁移能力和细胞的早晚期凋亡,从宏观生物物理学角度阐示了VEGF对mDCs的影响。第二部分用基因芯片、RT-PCR、傅里叶红外光谱及蛋白质印迹等分子生物学技术从基因和蛋白质水平上深入探讨了VEGF对mDC影响的机制。结果:与对照组相比,细胞电泳率和渗透脆性在30ng/ml(P<0.05)和50ng/ml(P<0.01)均减小;在50ng/ml时,mDCs的渗透脆性、粘弹性以及细胞的迁移率出现了最低值(P<0.01);细胞骨架系统F-actin发生重组且表达量上调(P<0.05);VEGF对mDC的凋亡无明显影响。基因芯片表达谱的结果发现:50ng/ml的VEGF使8280个基因表达上调,4205个基因表达下调,分别涉及了细胞粘附、迁移、细胞骨架重组和免疫应答等功能;RT-PCR验证发现:VEGF使mDCs中基因LIMK1、ARPC5、ITGB2、GSN、PDGFR、HSPB1和SDCBP下调,而使mDCs中基因PIP5K1B、EIF2S3和PKC表达上调,其中除ARPC5和PIP5K1B外均与芯片结果一致;共聚焦显微镜显示细胞骨架结合蛋白cofilin和P-cofilin在细胞中共定位,处理组P-cofilin/cofilin荧光强度显著减少(P<0.01);傅里叶红外光谱技术发现mDCs中部分蛋白质的二级结构发生改变;蛋白质印迹结果显示骨架蛋白结合蛋白Fascin-1和profilin表达有下调趋势,cofilin表达有上调趋势,P-cofilin表达明显上调(P<0.05),骨架蛋白结合蛋白的调节蛋白LIMK1的表达下调(P<0.05)。结论:本研究发现VEGF以浓度依赖方式影响mDCs的生物物理学特性和运动能力,并表明VEGF可能通过RhoA-cofilin1信号通路损坏mDCs的运动和免疫学功能。这可能对深入理解肿瘤的免疫逃逸机制和提高基于DCs的抗肿瘤免疫的临床治疗效率来说具有更重要的意义。