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恶性肿瘤具有高发病率和高死亡率的特点，是一类严重威胁人类健康和生命的疾病。目前关于恶性肿瘤的治疗手段主要有化学治疗、手术、放射治疗等，现有的化疗药物虽对大多数肿瘤有一定的疗效，但选择性差、毒副反应大、耐药性等问题明显限制了治疗效果，因此，寻找高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药物是非常有前景的肿瘤治疗方向。多肽具有分子量小、无免疫原性、活性高、副作用小，尤其是对多药抗性的肿瘤细胞系也有很好的抑制活性的优点，成为近年来国内外研究的热点。本实验以海洋生物虾蛄为原料，综合利用酶解、超滤法、凝胶柱分离法、反相高效液相色谱技术等分离纯化手段，研究了虾蛄的酶解工艺，多肽的多级分离纯化的技术方法和活性肽的生物活性研究，为开发虾蛄酶解多肽抗肿瘤的应用提供理论依据。1.虾蛄的酶解工艺研究：为确立虾蛄多肽酶解工艺的最佳条件，实验先通过单因素实验研究了时间、温度、加酶量和pH值对多肽提取率的影响，确定合适的水平，再采用响应面分析方法对工艺参数进行优化，得到回归方程：Y=－43.73356+7.45713X1+0.75917X2+0.33395X3+1.9687X4+0.16X1X2－0.0076X1X3+0.03X1X4－0.0225X2X3+0.4625X2X4－0.0051X3X4－0.43707X12－1.46604X22－0.00207567X32－0.29907X42，由上述方程可得最佳酶解条件：pH为8.36，酶解温度55℃，酶解时间3.95h，酶量0.92%，氨基氮含量为0.896mg·g-1，预测值：0.88mg·g-1，水解度为：26.52%。2.多肽的分离纯化研究：主要是将酶解物用超滤、葡聚糖凝胶G-25（SephadexG-25）和反相高效液相色谱法进行分离、纯化，并采用MTT法检测各分离组分对肿瘤细胞的抑制作用。首先酶解物经超滤后得到三个组分O1、O2、O3，其中组分O3的肿瘤抑制率最高，质量浓度为15mg·mL-1时的抑制率为60.03%，将O3再经Sephadex G-25纯化后得到三个组分OS1、OS2、OS3，其中活性最高的组分OS2对PC-3细胞、DU-145细胞、A549细胞的IC50分别为：6.702mg·mL-1、5.665mg·mL-1、6.723mg·mL-1，对肿瘤的抑制作用呈明显的剂量依赖性。最后将OS2收集后经高效液相色谱法分离得到三个组分：HOS1、HOS2、HOS3，以HOS2的抗肿瘤活性最强，将该组分用高效液相色谱柱反复纯化，最终得到纯度较高的活性肽FHOS，此肽的氨基酸序列为Phe Tyr Met Asn His，分子量为710.82。3.FHOS抗氧化和抗肿瘤活性研究：（1）FHOS的抗氧化性研究：经测定，FHOS的超氧阴离子清除率为：31.78%。还原力A700为0.259。DPPH自由基清除率和羟自由基清除率的IC50分别为5.504mg·mL-1和3.268mg·mL-1。与0.1mg·mL-1的维生素C的抗氧化作用相比，FHOS对DPPH自由基和羟自由基有很好的清除作用。（2）FHOS的肿瘤抑制性研究：用MTT法测定其对前列癌PC-3细胞和肺癌A549细胞增殖抑制作用，作用72h后，FHOS对A549和PC-3细胞的最高增殖抑制率达到70.1%和90.0%。（3）FHOS对肿瘤细胞抑制的细胞形态学观察：HE染色结果表明，FHOS作用24后，两种肿瘤细胞均出现细胞核固缩，染色质凝集，出现凋亡小体的典型的细胞凋亡特征。