随着养殖业的大力发展,人用非甾体抗炎药作为兽药同样发挥良好的效果。兽用非甾体抗炎药常用于动物机体的发热、术后的镇痛、抗炎,在我国养殖行业中具有巨大的市场前景,具有研发的潜在价值。扎托布洛芬是应用于人的非甾体抗炎药,为高选择性环氧化酶-2抑制剂,对环氧化酶-1的抑制能力较弱,因此具有强大的抗炎和镇痛作用。扎托布洛芬的结构含有羧基,使用剂量过高时可能会引起动物的胃肠道损伤,而2-噻吩甲醛腙含有抗炎活性较好的噻吩基团,两者具有酰胺化的可能。上述药物的骈合既可以增强扎托布洛芬的药效又可以减少其毒性。前期已有研究人员证明了骈合后的药物具有抵抗LPS诱导的RAW264.7细胞的炎症的能力,而且效果上明显优于ZPF。为了后续药物的研究,本文通过优化两种合成工艺,确定最佳合成技术路线,并对该药物进行初步毒理学研究,为后续工业化生产及药物的研发提供科学依据。1.缩合试剂法合成扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙及工艺优化首先将2-噻吩甲醛与水合肼反应合成2-噻吩甲醛腙,其次用4-二甲氨基吡啶、1-乙基-3-（3-二甲氨丙基）碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺对扎托布洛芬的羧基进行活化,活化后与2-噻吩甲醛腙反应生成扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙孪药。对扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙合成工艺（投料比、反应时间、溶媒用量）和重结晶条件（时间、温度、溶剂的选择及用量）进行优化。最终确定最佳的合成工艺为:扎托布洛芬:2-噻吩甲醛腙为1:1.75,溶媒用量15 mL,反应时间8 h;最佳重结晶条件:溶剂二氯甲烷,滤饼:二氯甲烷=1:2,温度4℃,时间10 min。化合物的表征主要采用液-质联用确认化合物的分子量、核磁氢谱确定其结构,高效液相色谱法及薄层色谱法鉴定纯度等。2.酰氯法合成扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙及工艺优化通过扎托布洛芬与草酰氯反应制备扎托布洛芬-酰氯,在冰水浴条件下滴加溶于二氯甲烷的扎托布洛芬-酰氯,即可得扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙。此外,探讨了扎托布洛芬与草酰氯最佳投料比、扎托布洛芬-酰氯与2-噻吩甲醛腙配比、反应时间等因素对目标化合物生成的影响。最终确定其最佳合成工艺为:扎托布洛芬:草酰氯=1:2,扎托布洛芬酰氯:2-噻吩甲醛腙=1:1.5,反应时间为6 h。药物的表征有液-质联用确认化合物的分子量、核磁氢谱确定其结构,高效液相色谱法及薄层色谱法鉴定纯度。3.扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙急性毒性试验通过小鼠经口急性毒性试验,对扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙孪药的半数致死量进行研究。采用上下法进行试验,将扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙经羧甲基纤维素钠配置成混悬液,通过经口灌胃的方式对SPF级昆明小鼠进行染毒,存活的小鼠观察14天,观察并记录实验小鼠的中毒情况以及是否发生死亡,用AOT425软件计算结果。试验得出扎托布洛芬-2-噻吩甲醛孪药的LD50＞5000mg/kg,依据急性毒性分级表判断扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙实际无毒。4.扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙细菌回复突变试验利用鉴定合格的鼠伤寒沙门氏菌变异型菌株,即TA97、TA98、TA100、TA102菌株,在加和不加大鼠肝S9两种代谢活化系统条件下测定扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙诱导细菌回复突变的能力。试验方法采用平皿掺入法,依据扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙的溶解度以及对细菌的毒性作用,将药物的浓度设定为0.2 mg/皿、0.01 mg/皿、0.05 mg/皿、0.025 mg/皿、0.0125 mg/皿,同时设定未处理组、溶剂对照组和阳性对照组。采用平板计数法,对各培养皿中回变菌落数量进行统计,并对试验结果进行记录与分析。两次Ames结果显示,无论是否加大鼠肝S9,各个浓度下的扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙平均自发回变菌落数与溶剂对照组相比均低于2,无剂量反应关系。表明扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙在本试验条件下细菌回复突变试验为阴性,初步表明该化合物不具有致突变性。本课题以两种技术路线合成扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙,并分别对其进行结构上的鉴定以及合成工艺优化,为后续药物的研究及实现工业化生产提供可能的技术途径。通过小鼠经口急性毒性试验、细菌回复突变试验试验对扎托布洛芬-2-噻吩甲醛腙进行初步毒理学研究。试验得出该药物LD50＞5000 mg/kg,说明该药物实际无毒。两次细菌回复突变试验结果为阴性,表明该化合物不具有致突变性,为后续的毒理学研究和新兽药的研发提供一定的科学依据。