论文部分内容阅读
目的研究1,25-(OH)2D3对LO2细胞脂肪变性的影响，并探讨可能的作用机制。方法体外培养正常人肝细胞L02细胞株，用油酸（OA）诱导其脂肪变，建立非酒精性脂肪肝细胞模型。将细胞分为5个组：（1）空白对照组；（2）模型组：OA0.2mmol/L；（3）干预组1：OA0.2mmol/L+1,25-(OH-)2D3108mol/l；（4）干预组2：OA0.2mmol/L+1,25-(OH)2D310-7mol/l；（5）干预组3：OA0.2mmol/L+1,25-(OH)62D310-mol/l。干预组先加入不同浓度1,25-(OH)2D3干预24h，之后加0.2mmol/L的OA24h,配成105/ml的悬液进行测量。使用油红O染色法检测细胞内脂滴的含量，使用磷酸甘油氧化法来测定细胞内甘油三酯（TG）含量,使用自动生化仪酶分析法来检测细胞上清液中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的含量，实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组细胞维生素D受体（VDR）、胰岛素诱导基因2（INSIG-2）、固醇调节元件结合蛋白(SREBP-Ic)、细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)的mRNA表达水平。结果1、油红O染色显示细胞内脂滴变化：镜下可见细胞边缘清晰，排列紧密。对照组可见胞质内仅有少量散在橙红色脂滴；模型组可见胞质内存在大量大小不等的脂滴，甚至融合；与模型组相比，干预组随干预浓度增高，细胞内脂滴大小逐渐变小，数量逐渐减少。2、细胞内TG含量的变化及细胞上清液ALT的变化：模型组较对照组，细胞内TG含量明显增多，t=14.14,P<0.01；上清液中ALT量含明显升高，t=14.24，P<0.01。干预组各组较模型组，随着1,25-(OH)2D3浓度增高，细胞内TG含量随之所降低,t=3.26，5.21，7.30，F=60.72，P值均<0.01；上清液ALT含量也随之降低，t=5.72，8.03，11.67，F=56.02，P值均<0.05。3、细胞VDR、INSIG-2、SREBP-Ic mRNA的表达的变化：模型组较对照组，SREBP-Ic mRNA表达明显上升，t=7.19，P<0.01。干预组各组较模型组，随着1,25-(OH)2D3浓度增高，细胞VDR mRNA的表达随之增高，t值分别为：2.40，3.71，5.60，F=10.89，P值均<0.05；INSIG-2mRNA的表达也随之增高，t值分别为：t=3.82，5.30，10.75，F=37.21，P值均<0.05；SREBP-Ic mRNA表达随1,25-(OH)2D3浓度增高而降低，t值分别为：2.25，4.12，6.99，F=18.25，P值均<0.05。相关性分析显示：VDR mRNA的表达与INSIG-2mRNA的表达正相关，r=0.93，P<0.01；INSIG-2mRNA的表达与SREBP-Ic mRNA的表达负相关，r=-0.85，P<0.01。4、细胞SOCS-3mRNA表达的变化：模型组SOCS-3mRNA表达为（4.61±0.39），较对照组（1.00±0.00）明显上升，t=8.76,P＜0.01；干预组SOCS-3mRNA表达分别为：（3.71±0.69）、（2.67±0.70）、（1.31±0.42），较模型组SOCS-3mRNA表达均有所下降，且随着1,25-(OH)2D3浓度增加而降低，F=22.13,P＜0.01。结论1.1,25-(OH)2D3可抑制OA诱导的L02细胞脂肪变；2.其作用机制可能与1,25-(OH)2D3参与调节INSIG-SCAP-SREBP代谢通路的表达有关；3.其作用机制可能也与1,25-(OH)2D3抑制SOCS-3的表达有关。