脂肪肝是奶牛常见病之一，且多发于围产期高产奶牛。脂肪肝不仅会导致奶牛产奶量下降，而且会诱发多种其他疾病，给养殖户带来巨大的经济损失。最近几年，奶牛脂肪肝的发病率呈现逐年上升趋势，但对于其发病原因及机制还不明确。虽然很多研究人员对其相关发病机理进行了大量的探究，但从细胞水平上，运用分子生物学技术手段来研究其发病机制并不多见。关于CYP450和NF-κB与奶牛脂肪肝形成关系的研究较少，其作用机制不甚明确，值得深入探讨和研究。　　本研究采用胶原酶两步灌流法，成功的分离培养了奶牛原代肝细胞。用DL-乙硫氨酸诱导肝细胞脂肪变性后，采用生化法测定ALT、AST、TG、TC的含量或活性，MTT法测定肝细胞的存活率，油红O染色法观察肝细胞内脂滴数量、颜色和大小。根据以上所测数据及对油红染色图片的观察和分析，筛选建立奶牛肝细胞脂肪变性模型的最佳条件。造模成功后，用不同浓度的丹参处理变性肝细胞，检测肝细胞中ALT、AST、TG、TC、SOD和MDA的含量或活性。采用ELISA法检测奶牛肝细胞内TNF-α的含量，油红O染色法观察肝细胞内脂滴数量、颜色和大小，Western blot法检测肝细胞中NF-κB和CYP450的蛋白表达水平。本试验旨在探究TNF-α、NF-κB和CYP450与奶牛脂肪肝的相互关系，揭示脂肪肝的发病原因及机制，为临床上疾病的预防和治疗提供参考。　　结果显示，用胶原酶两步灌流法分离到的肝细胞，形态完整，贴壁良好，存活率约94％，可用于本试验进一步的研究。DL-乙硫氨酸诱导肝细胞后，根据所测肝细胞中TG、TC含量变化结果，MTT法所测细胞存活率及对油红染色图片的观察和分析，最终选定2 mmol/L的DL-乙硫氨酸培养24 h作为最佳的造模条件。丹参处理脂肪变性肝细胞后，能降低ALT、AST、TG、TC和MDA的含量或活性，抑制TNF-α的释放，增加SOD活性。随丹参浓度增加和处理时间的延长，CYP450的表达呈逐渐降低的趋势。24h时，丹参对NF-κB的表达无明显影响;48h时，随丹参浓度的增加，NF-κB的表达呈逐渐降低的趋势。　　丹参对奶牛肝细胞的脂肪变性有一定的治疗作用，可能与丹参能够改善脂质代谢紊乱、抑制TNF-α的释放、抗脂质过氧化反应以及降低NF-κB和CYP450的表达有关。