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以完整的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)粒子作为包被抗原,建立了间接ELISA法用于对猪传染性胃肠炎的流行病学调查及进出口大量血清样本的筛选。结果表明该方法与血清中和试验阳性符合率高达94.40%。该间接ELISA因操作简单,重复性好,检测所需时间较短,从而大大提高了检测效率。 根据TGEV、PRCV的基因核苷酸序列,设计了两对引物,跨越S基因的B、C抗原位点,采用逆转录套式PCR用于快速检测和区分TGEV和PRCV,其中TGEV扩增产物长886bp,PRCV扩增产物长214bp。建立的逆转录套式PCR具有较好的特异性和敏感性。 对国内TGEV毒株:山东株、华毒株、TH-98进行了逆转录套式PCR扩增,对扩增产物进行测序,同时进行了同源性比较。结果三者的核苷酸序列与美国(Neb72-rt、purdue-15、Miller)、英国(96-133、Fs772-70)、韩国(133、Hkt2)、日本(To14)、台湾(Tf1)等毒株序列均具有很好的同源性,达93%以上。推导的氨基酸序列同源性达89%以上。 在TGEV S基因的5′端约2.2kb片段包含了S基因的主要抗原位点A、B、C、D四个抗原位点,B位点存在于97~144残基区,C位点存在于48~52残基区。对三毒株的B、C抗原位点的核苷酸序列和氨基酸序列进行了比较,发现三毒株的C抗原位点可用48-P/S-P-N-S-D-52,其中第51位氨基酸为Ser,与资料报道相符。华毒株的B抗原位点发生改变,即第97位氨基酸发生改变,由Trp突变为Ser,同时第100位氨基酸发生改变,由Arg改变为Lys。而山东株、TH-98株没有发生改变。根据系统发育进化树发现,山东株与华毒株、TH-98亲缘关系较远,本研究为进一步揭示我国北方地区流行的TGEV毒株的分子生物学特征及揭示TGEV强弱毒株差别的分子机制,开展新型疫苗研制及进行分子诊断的研究奠定了重要的基础。