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鸭瘟病毒(Duck Plague Virus,DPV)属于α疱疹病毒科,已知其他α疱疹病毒的ICP4是一个立即早期(Immediate Early,IE)基因,而DPV的ICP4的研究数据较为缺乏,转录调控功能的研究未见报道。本文对DPV的ICP4基因的转录、调控等开展研究,获得以下结果。1.DPV的ICP4基因类型以绿色荧光蛋白作报告基因,观察pEGFP-ICP4在鸭胚成纤维(DEF)细胞中的荧光分布,发现绿色荧光仅分布在细胞核中,初步确定ICP4蛋白定位于细胞核;进一步将鼠抗ICP4多克隆抗体用于间接免疫荧光中,检测DPV感染DEF细胞后,ICP4的定位,发现仅在细胞核中检测到ICP4蛋白,表明ICP4蛋白定位于细胞核中。使用荧光定量PCR方法检测DPV感染DEF细胞后ICP4基因在不同时间的转录水平,结果显示在病毒感染后2 h即可检测到ICP4的表达,其表达量持续升高并于36 h达到峰值;进一步用PCR检测核酸合成抑制剂GCV和蛋白质合成抑制剂CHX对DPV感染DEF后,ICP4转录是否受到影响,结果显示两种药物均未能影响ICP4的转录,表明DPV的ICP4具有α疱疹病毒IE基因的特点。2.DPV的ICP4基因转录调控RT-qPCR检测过表达ICP4对DPV感染DEF细胞后部分病毒基因转录水平的影响,结果显示,在感染后12 h,IE基因ICP27的mRNA水平上调,感染后24 h早期(Early,E)基因TK和UL28、晚期(Late,L)基因gC和UL15的mRNA水平上调,感染后48 h实验组的细胞大片死亡,所以各个基因的mRNA水平都低于对照组,表明过表达ICP4加快了DPV感染DEF的进程;进一步使用双荧光素酶报告系统检测ICP4对病毒基因启动子的调控,结果发现ICP4可上调TK、UL28、gC、UL15及ICP27的启动子活性,而下调自身基因启动子的活性,表明ICP4对病毒的IE基因、E基因及L基因都具有转录激活作用,但对自身基因具有转录抑制作用。3.DPV的ICP4基因抗凋亡检测用双荧光素酶报告系统检测ICP4对抗凋亡基因US5的影响,结果发现真核表达ICP4可上调抗凋亡基因US5的启动子活性,表明ICP4对抗凋亡基因US5具有转录激活作用;但RT-qPCR检测过表达ICP4不影响双氧水诱导凋亡细胞的caspase-3 mRNA转录水平。综上,DPV的ICP4是一个IE基因,其蛋白定位于细胞核中。ICP4可激活部分DPV的IE基因、E基因和L基因的转录,但抑制自身基因的转录;ICP4不具有直接抗凋亡的功能。