背景和目的:急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)指由多种病因导致的肾脏功能迅速下降而出现的临床综合征,伴随较高的发病率及死亡率。缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IRI)是临床AKI的重要致病因素。研究显示,AKI与氧化应激、细胞凋亡、炎症等有关,但目前还尚无有效的方法治疗AKI。丹红注射液(Danghong Injection,DHI)因具有抗炎作用,在临床中常用于治疗多种心肌缺血及脑缺血疾病,因此,我们猜测DHI可能用于治疗IR-AKI。本研究拟通过建立IR-AKI大鼠模型结合体外缺氧复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)诱导的细胞损伤模型,探明DHI对于IRI-AKI的保护作用及其机制,为临床AKI的预防与治疗、创新药物的研发提供理论基础。方法:体内研究DHI对缺血再灌注所致大鼠急性肾损伤的保护作用:(1)DHI在术前连续一周尾静脉注射,剂量为3mL/kg/d,假手术组及模型组给予同等剂量的生理盐水;(2)建立大鼠IRI所致AKI模型,检测各组大鼠血肌酐及尿素氮水平,PAS染色观察病理变化;(3)TUNEL染色观察肾小管上皮细胞的凋亡,免疫荧光染色观察肾小管上皮细胞中巨噬细胞的浸润;(4)采用Western blot法检测KIM-1及NF-κB信号通路中TNF-α、NF-κB P65及p-NF-κB P65的蛋白表达量;(5)采用RT-qPCR法检测KIM-1、TNF-α及IL-6的mRNA表达量。体外研究丹红注射液对缺氧复氧所致大鼠近曲小管上皮细胞损伤的保护作用:(1)采用CCK-8法检测不同浓度DHI、不同刺激时间对NRK-52E细胞存活率的影响;(2)建立NRK-52E的H/R模型,采用流式细胞技术检测细胞凋亡;(3)采用Western blot法检测NF-κB信号通路中KIM-1、TNF-α、NF-κB P65及p-NF-κB P65的蛋白表达量;(4)采用RT-qPCR法检测KIM-1、TNF-α及IL-6的mRNA表达量。结果:动物实验结果发现大鼠经肾缺血再灌注24h后,血肌酐、尿素氮明显升高,通过PAS染色观察到肾小管上皮细胞坏死脱落、形成管型等病理改变,ATN评分明显升高,表明IR引起肾功能及病理损伤;TUNEL染色显示肾小管上皮细胞凋亡。免疫荧光结果显示,肾IR引起炎细胞浸润。NRK-52E细胞经H/R后,流式细胞术检测结果显示,缺氧6h、复氧6h引起明显的细胞凋亡,模型建立成功。DHI预处理后,体内DHI显著降低大鼠血肌酐及尿素氮,减轻肾脏病理损伤,减少巨噬细胞浸润及近曲小管上皮细胞凋亡。体内及体外Western blot及RT-qPCR结果显示,与模型组相比,DHI处理后,NF-κB信号通路相关蛋白KIM-1、TNF-α、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达量及KIM-1、细胞因子TNF-α及IL-6的mRNA表达量显著下降。结论:DHI减轻IR-AKI引起的肾脏损伤及H/R引起的NRK-52E细胞的凋亡,减少IR-AKI引起的巨噬细胞浸润。同时,DHI减少以KIM-1为肾损伤标志的肾小管上皮细胞损伤,抑制NF-κB信号通路。综上所述,本研究首次发现DHI通过抑制NF-κB信号通路对IR所致的AKI损伤具有保护作用。以上研究结果表明,DHI可能为潜在的AKI治疗药物,同时NF-κB可能为AKI的治疗靶标。