目的病毒性爆发性肝炎（Viral fulminant hepatitis,简称FH）是一种严重的肝脏疾病,由于肝脏组织炎症反应过度,死亡率较高。对FH疾病中的炎症信号通路缺乏认识严重阻碍了临床疾病干预措施的实施。髓系分化原反应基因88（MyD88）是大多数TLR、IL-1R和IL-18R依赖性炎症信号通路的关键受体蛋白,在介导宿主对病原菌入侵的原反应中发挥重要作用。这种信号通路的过度激活会加剧某些疾病,而这些疾病在本质上是致命的。但MyD88信号通路是否及如何参与病毒性爆发性肝炎（viral fulminant hepatitis,FH）的发病机制尚不清楚。本研究旨在通过揭示MyD88介导的信号通路与病毒性爆发性肝炎的关系,为FH疾病的治疗策略提供新的线索和实验依据。方法构建小鼠病毒性爆发性肝炎模型,监测C57BL/6、Rag-1^-/-、Trif^-/-、Myd88^-/-小鼠20天内的存活情况;感染MHV3病毒0h、48h和72h后,收集MyD88^-/-和WT小鼠的肝脏组织,用HE染色检测两组小鼠肝脏损伤差异;用Tunel技术检测小鼠肝细胞凋亡情况;采用Western-Blot检测感染48h和72h后小鼠肝脏内MHV-3受体Bgp-1的表达情况;采用斑块法分析感染72h后肝脏病毒滴度。感染MHV3病毒0h、24h、48h和72h后,收集MyD88^-/-和WT小鼠的肝脏组织,用RT-qPCR、Western-Blot、ELISA检测FGL2的mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测FGL2和Fibrinogen的表达情况。监测FGL2^-/-和C57BL/6小鼠感染MHV3病毒20天内的生存差异。用RT-qPCR、Western-Blot、免疫组化检测小鼠IFN-γ、TNF-α、IL-6和proIL-1β的mRNA和蛋白表达水平;监测TNF-α^-/-、IL-1R^-/-和C57BL/6小鼠感染MHV3病毒20天内的生存差异。相同周龄的C57BL/6（WT）和MyD88^-/-小鼠感染MHV-3（100 PFU）后,从感染的肝脏中分离细胞,用流式细胞术检测肝脏中Lin^-Thy1.2⁺ILCs浸润情况;用统计学分析肝脏中Lin^-Thy1.2⁺ILCs和NKp46^-Lin^-Thy1.2⁺Roγt⁺ILC3浸润情况;NKp46^-Lin^-Thy1.2⁺Roγt⁺ILC3细胞分泌的IL-17、TNF-α和IL-1β用流式进行检测。巨噬细胞系Raw264.7细胞经MHV-3感染（MOI=1）,免疫荧光共聚焦显微镜监测未感染或感染24h后HMGB1定位;ELISA检测细胞上清液中HMGB1的浓度。相同周龄的C57BL/6（WT）和MyD88^-/-小鼠感染MHV-3（100 PFU）后,分别在不同时间点提取肝组织,用免疫组化和免疫荧光检测HMGB1蛋白在正常和感染MHV-3的肝组织中表达情况;用ELISA检测MyD88^-/-和WT小鼠血清中HMGB1的浓度,N=5/组;用Western-Blot检测MyD88^-/-和WT小鼠肝脏中HMGB1蛋白水平,N=4/组。结果与WT小鼠相比,MyD88^-/-小鼠的生存周期明显延长（P<0.001）。HE和Tunel结果显示MyD88^-/-小鼠的肝组织损伤和肝细胞凋亡情况明显减轻。Western-Blot显示MyD88^-/-小鼠的MHV3受体Bgp-1蛋白表达明显降低。斑块法分析感染MHV3病毒72h后MyD88^-/-小鼠肝脏病毒滴度显著下降（P<0.05）。RT-qPCR、Western-Blot、ELISA检测显示MyD88^-/-小鼠肝脏中fgl2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,尤其是在72h差异最为明显（P<0.05）。免疫组化显示相比WT小鼠,MyD88^-/-小鼠的fgl2和fibrinogen表达显著下降。相比C57BL/6小鼠,fgl2^-/-小鼠的生存周期明显延长（P<0.001）。RT-qPCR、Western-Blot和免疫组化检测结果显示MyD88^-/-小鼠肝脏中IFN-γ、TNF-α、IL-6和proIL-1β的表达显著下降（P<0.05）。相比C57BL/6小鼠,TNF-α^-/-和IL-1R1^-/-小鼠的生存期显著延长（P<0.05）。流式细胞仪检测显示,在感染MHV3病毒24h和48h后,WT肝脏中浸润的ILCs（Lin^-Thy1.2⁺）明显高于MyD88^-/-小鼠（P<0.05）。此外,统计分析表明,MyD88^-/-小鼠感染MHV-3后,肝脏组织中的NKp46^-Lin^-Thy1.2⁺Roγt⁺第三组固有淋巴细胞（ILC3）显著减少。而这些ILC3有能力产生促炎介质,如proIL-1β,TNF-α和IL-17等。巨噬细胞系Raw264.7细胞未感染时,免疫荧光共聚焦显微镜显示HMGB1分布在细胞核内。而当细胞感染MHV-3（MOI=1）后,HMGB1定位于细胞的细胞核和细胞质内。而且,感染72h后,上清液中积累的HMGB1浓度也随时间逐渐增加。在感染MHV3病毒的小鼠肝脏内,发现了同样的现象,HMGB1从细胞核迁移到胞质内,并且相比WT小鼠,MyD88^-/-小鼠血清和肝脏中的HMGB1显著下调（P<0.05）。结论成功构建了病毒性爆发性肝炎模型,阐明了MyD88^-/-小鼠可以通过减少肝脏中HMGB1的分泌,进而减弱促炎反应;可以通过减少肝脏中NKp46^-Lin^-Thy1.2⁺Roγt⁺第三组固有淋巴细胞（ILC3）的浸润,减少多种促炎细胞因子的分泌,进而减轻肝脏组织的病变和损伤情况,延长感染爆发性肝炎小鼠的生存周期。综上结果所述,MyD88基因会加重实验性病毒性重型肝炎的免疫病理。我们可以通过适当调节MyD88信号通路,并结合阻断其他炎症因子,来达到治疗人类病毒性FH等严重炎症疾病的目的。