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印度块菌是一种珍贵的菌根食用真菌,味道鲜美,营养价值高,富含多种活性物质并具有较高的保健功效和商业价值。但因其生长条件特殊,生长周期长,产量低且不易人工培育,故市场供不应求。赤芝是我国传统的名贵中药,具有多种药用价值,分布广泛,现已实现规模化人工栽培。作者应用原生质体融合育种技术,对印度块菌和赤芝的原生质体制备、再生及融合条件进行了研究并对融合子进行了筛选和鉴定,以期能获得兼具两亲本优点的融合菌株。为今后融合菌株的开发,及其菌菌丝体的深层发酵、活性物质的提取、融合菌株的育种研究奠定基础。实验采用正交设计法,对印度块菌和赤芝的最佳液体培养基和原生质体的制备、再生条件进行了筛选和系统的研究。得到印度块菌最适液体培养基配方为：葡萄糖2.00%,麦芽糖1.50%,蛋白胨0.15%,酵母浸粉0.25%,KH2PO40.30%、 MgSO4·7H2O 0.15%, VB10.008%, pH自然。25℃,120r·min-1培养120 h,其生物量可达9.58g·L-1。经筛选验证,确定赤芝的最佳液体培养基配方为：葡萄糖2.00%,蔗糖0.30%,蛋白胨0.20%,酵母粉0.20%,KH2PO40.30%, MgSO4·7H2O 0.15%,VB10.004%, pH自然。印度块菌原生质体最佳制备条件体系为：培养2d的菌丝以0.6mol/L的蔗糖溶液做渗稳剂,在2%溶壁酶+1%纤维素酶的酶液中,36℃酶解4h,制备率最高可达4.9×107个/ml；赤芝原生质体最佳制备体系为：培养8d的菌丝以0.6mol/L甘露醇为渗稳剂,在1%溶壁酶+l%蜗牛酶+1%纤维素酶的混合酶液中,30℃酶解3h,制备率最高可达1.05×108个／ml。印度块菌原生质体最佳再生体制备系为：培养2d的菌丝,以0.6mol/L的KCl溶液作渗稳剂,在2%溶壁酶酶液中,30℃酶解3h,再生率可达8.74×10-1。赤芝的原生质体最佳再生制备体系为：培养8d的菌丝,以0.6mol/L蔗糖溶液为渗稳剂,在2%溶壁酶酶液中,36℃酶解3.5h,再生率可达6.79×10-1。实验采用双灭活标记法对亲本原生质体进行标记、融合。结果表明,印度块菌最佳热灭活条件是：55℃热水浴处理10min；赤芝最佳紫外灭活条件为：30W紫外灯下30cm处,垂直照射100s；最佳融合条件为：30%PEG6000,40mmol/LCa2+、30℃, pH8.0融合25min,融合率达8.43×10-7。最后通过菌落表型、菌丝形态、菌丝生长速度的对比以及颉颃实验并结合RAPD, ERIC分子标记方法对融合子进行了鉴定。结果表明,两融合子是亲本的融合产物,融合子Ra与印度块菌亲缘关系最近,融合子Rb则与赤芝的亲缘关系更近。