本文以逆流色谱技术(counter–current chromatography,CCC)为核心,针对现有方法和技术的不足,利用超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction,SFE)和逆流色谱联用技术、超滤色谱(Ultrafiltration chromatography,UF)和逆流色谱联用技术对中草药化学成分进行了快速分离分析研究,具体内容包含以下几个方面。一、应用梯度逆流色谱技术分离罗布麻花中化学成分。中草药成分的极性范围通常较宽,而传统的逆流色谱难以一次将极性范围较宽的化合物分离提取出来,针对该问题,利用梯度逆流色谱洗脱方法,目的是采用不同极性的流动相将中草药中极性范围较宽的化合物依次洗脱出来。利用该方法从罗布麻花粗提物中分离得到9个化合物,且纯度均达到80.0%以上。实验结果表明梯度逆流色谱技术为中草药化学成分的分离提取提供了新的方法。二、利用超临界流体萃取和逆流色谱(SFE–CCC)联用技术分离花色素类成分。该联用技术与传统分离提取方法相比具有以下优势:①超临界萃取技术作为一种高效环保的提取技术,有效节省了大量的提取溶剂;②实验所述的超临界萃取技术和逆流色谱联用技术分两个阶段进行。在进行第一阶段的分离纯化工作的同时可以正常开展第二阶段的提取纯化实验,节省大量提取纯化时间;③花色素类物质用传统方法提取时不可避免的会接触到空气和光,对于这类不稳定化合物极易造成分解、变性、失活等现象,所设计的方法在密闭环境下进行,有效避免了上述情况的发生。利用该技术从木瓜花瓣中一次性成功分离纯化得到飞燕草素–3–O–葡萄糖苷,花青色素–3–O–葡萄糖苷,芍药花青素–3–O–葡萄糖苷、飞燕草素、芍药花青素和锦葵色素且纯度均达到95.00%。此外,应用该技术从玫瑰花中分离纯化得到芒柄花青素、飞燕草素、花青素、5,6,4′–三羟基–7,8–二甲氧基黄酮、5,3′–二羟基–7,8–二甲氧基黄酮和5–羟基–6,7,8,3′,4′–五甲氧基黄酮,纯度均达到90.00%。三、选取与痛风相关的作用靶点—黄嘌呤氧化酶及与糖尿病相关的作用靶点—α–葡萄糖苷酶为生物靶分子,同时筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂及α–葡萄糖苷酶抑制剂,利用超滤色谱与逆流色谱联用技术从黄柏粗提物中快速筛选并分离纯化得到具有α–葡萄糖苷酶抑制作用和黄嘌呤氧化酶抑制作用的单体化合物(巴马汀、小檗碱及黄柏内酯)。与传统的筛选纯化方法相比其具有快速灵敏、高效准确、高通量等特点。因此,该方法可作为从复杂样品中快速筛选及分离α–葡萄糖苷酶抑制剂和黄嘌呤氧化酶抑制剂的手段,实现了同时评价和分离中草药化学成分的研究目标。四、利用数学模型优化逆流色谱溶剂系统。逆流色谱分离化学成分的关键取决于溶剂系统的选择。通常需要查阅文献并以所分离物质的极性来确定,在筛选中,需要对十几个甚至更多的溶剂系统进行筛选优化,然后计算所要分离物质在溶剂体系中的分配系数(K),最后通过分配系数结果筛选最佳的分离溶剂体系。然而,该方法筛选得到的溶剂体系常常带有一定的盲目性和随机性,重要的是这种方法得出的溶剂系统可能达不到单体分离的最佳效果。因此,利用数学模型作为考察分配系数和系统溶剂间比例关系的工具,通过预先设定分离物质的理想分配系数来拟合系统溶剂间比例。这种方法与常规方法相比最大优势在于数学模型计算所得出的溶剂系统可直接作为逆流色谱分离体系,达到理想分离效果。实验应用超滤色谱与逆流色谱联用技术从珠子参提取物和竹节参提取物中分别快速筛选并分离纯化得到6个黄嘌呤氧化酶抑制剂和6个α–葡萄糖苷酶抑制剂,得到的化学成分纯度均高于90.0%。实验结果表明利用数学模型优化逆流色谱溶剂系统具有较好的准确性。