论文部分内容阅读
目的:橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin),菊科(Compositae)蒲公英属多年生宿根型草本植物,又称俄罗斯蒲公英,与巴西橡胶树、银胶菊一起并称为全球三大产胶植物。橡胶草的根叶均有乳管组织,从中提取的橡胶结构和性能与巴西橡胶树橡胶相似,且多年生植株的根内含有高达20%的橡胶,是具有良好开发前景的产胶植物,同时也是能用来研究产胶植物产胶机理的理想模式植物,具有很好的研究前景。本研究通过采自野外的橡胶草植株,运用植物组织培养技术建立起橡胶草高频再生体系,并在此基础上进行农杆菌介导的遗传转化研究。方法:取橡胶草幼嫩叶片,研究了消毒时间、植物生长调节剂等因素对外植体成活率、再生芽的诱导、伸长和生根的影响。探讨了卡那霉素对橡胶草抗性芽诱导及生根的影响,以及羧苄青霉素和头孢霉素对根癌农杆菌的抑制效果,在此基础上确定了遗传转化中适宜的抗生素种类及浓度。通过根癌农杆菌介导法,将GUS基因导入橡胶草。遗传转化过程中,外植体经预培养48h,在添加有200mg/L乙酰丁香酮的农杆菌MS悬浮液中侵染30min,共培养48h,最后进行抗生素筛选培养。结果:在橡胶草再生体系建立的研究中,用0.1%的升汞处理叶片外植体,7min为最佳消毒时间,最佳的再生培养基为MS+1.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA,平均诱导率为97.3%,芽伸长培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.02mg/L NAA+0.4mg/L GA3,生根培养基为1/2MS+0.2mg/L NAA,生根率为100%,所获得的组培苗生长健壮且移栽成活率高。在农杆菌介导的遗传转化研究中,50mg/L的Kan对橡胶草的抗性芽具有很好的筛选效果,生根筛选时,Kan的适宜浓度为35mg/L,最佳抑菌抗生素为cb,适宜浓度为500mg/L。最终获得35株抗性试管苗,进行GUS染色及分子生物学检测,最终获得了6株转基因植株,转化率为17.1%。结论:本研究建立了橡胶草的高频再生体系,进行了农杆菌介导的遗传转化,获得了橡胶草转基因植株,为橡胶草后续的遗传转化研究奠定了基础。