顺铂诱导胃腺癌细胞两种相关形式的死亡

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背景:尽管胃腺癌的治疗手段较以前有了长足进展,但是到目前为止没有一种治疗手段能取得令人满意的治疗效果,这主要是由于胃腺癌细胞耐受现有化疗制剂诱导的细胞凋亡。因此从胃腺癌的凋亡耐受及胃腺癌细胞的死亡机制着手以寻求新的治疗手段和靶点越来越引起人们的关注。近来研究发现许多化疗药物也能够诱导自噬性细胞死亡和细胞程序性坏死。和细胞凋亡被称为Ⅰ型程序性细胞死亡对应,自噬性细胞死亡和程序性坏死分别被称为Ⅱ型和Ⅲ型程序性细胞死亡。DNA损伤制剂(如顺铂)是经典的化疗药物,临床上应用于包括胃腺癌在内的多种肿瘤的治疗,但是其诱导胃腺癌细胞死亡的具体分子机制尚不完全明确。 目的:阐明顺铂诱导胃腺癌细胞死亡的形式并进一步探讨其分子机制,在此基础上探讨胃腺癌细胞不同死亡形式之间的相互关系。 方法:常规体外培养的SGC-7901、BGC-823细胞,细胞传代24h后加入药物处理;MTT法检测顺铂处理后细胞生存率;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测顺铂处理后胃腺癌细胞凋亡率;吖啶橙染色后分别以荧光显微镜、流式细胞术对细胞酸性自噬泡(acidic vesicle organelles AVO)进行定性和定量检测;PI染色流式细胞术检测顺铂处理后细胞膜的完整性;透射电镜下观察死亡细胞的形态学特征;Caspase抑制实验检测细胞凋亡及其他形式细胞死亡的Caspase依赖性;半定量RT-PCR法检测p53、Puma、Noxa、Bim、Beclin 1的mRNA水平;Western blot法检测Noxa的蛋白水平。 结果:顺铂诱导胃腺癌细胞死亡具有剂量和时间依赖性,顺铂对两细胞系的细胞毒性差别不明显,48h时IC50约为3μg/ml;3μg/ml顺铂作用早期SGC-7901细胞
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