维生素B12(Vitamin B12)又叫钴胺素,是唯一一种含有金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是依靠微生物合成的,高等动植物不能制造维生素B12,植物中基本不含有维生素B12。萼花臂尾轮虫(Brachionus calyciflorus)是淡水经济动物良好的天然饵料,作为开口生物饵料具有营养价值全面、繁殖迅速和容易进行大量培养等优点,并且无污染、能满足不同鱼类的营养需求,极大提高育苗成活率。但在实际生产过程中,由于轮虫种群高峰期难以控制,苗种培育阶段供应严重不足,影响苗种生产效率。因此,探讨快速提高轮虫生产密度、延长轮虫高峰期持续时间在苗种生产上显得尤为重要。为本论文结合轮虫繁殖生物学特性开展了维生素B12对轮虫种群动态影响的研究,旨在为轮虫实际生产提供理论参考。论文主要研究结果如下:1.不同温度、不同浓度的维生素B12对萼花臂尾轮虫种群参数的影响光照强度约为4000lx,昼长比L:D=16:8,投喂蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa),密度为 3.0×106cells/mL。温度为20℃时,接种24h时,0.2、0.4、0.8和1.0 μg/ml维生素B12的处理组种群增长率(r)依次为0.26、0.36、0.33和0.35,均明显高于对照组(0.057)p<0.05)。第48h后,种群开始出现下降趋势,0.2、0.4、0.8、1μg/ml的增长率r值依次为0.21、0.34、0.28和0.40,但是依然高于对照组的0.12。添加浓度为1.0 μg/ml维生素B12的处理组,1-5d的增长率明显优于对照组及其他组。温度为25℃时,各组在前三天均呈现出快速增加的趋势,除对照组在第3d开始下降外,其他处理组第3-5d种群增长率缓慢上升。其中第5d,对照组和处理组(0、0.2、0.4、0.8 和 1.0μg/ml)r值依次为 0.76、0.89、0.91、0.92 和 0.93,各处理组增长率明显高于对照组。第9d开始,各组的增长率渐渐降低(低于第1d),第10d各组的种群增长率均低于第1d,浓度为0.2μg/ml的实验组增长率最低。0.8μg/ml处理组增长率显著高于对照组(p<0.05)。第10d,各浓度组的种群密度依次为:10.69±0.02、11.82±0.10、5.79±0.02、5.79±0.04 和 3.39±0.04ind./ml,种群密度差异显著(p<0.05)。30℃时,其中第1d各实验组均快速增长,第2d出现缓慢增长的趋势,第3d种群增长率呈现顶峰,对照组及各浓度组的增长率r值依次为1.18、1.26、1.37、1.32和1.40。第3d后,各实验组均呈现下降趋势,到第5d,种群开始衰减,增长率均低于第1d的增长率,各浓度组的增长率r值为0.97、0.90、1.09和1.03,但各维生素B12处理组均高于对照组的0.88。对照组的增长率从第3d开始就一直处于各实验组的最低状态。2.不同浓度的维生素B12对萼花臂尾轮虫平均寿命的影响光照强度约为4000lx,昼长比L:D=16:8,温度25℃,投喂蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)密度为3.O×106cells/ml。不同浓度维生素B12对萼花臂尾轮虫寿命影响的实验发现:浓度为1μg/ml的实验组轮虫的平均寿命最长,为137.3±6.6h,与对照组比,各维生素处理组轮虫平均寿命均有显著延长。实验浓度为0、0.2、0.4、0.8和1μg/ml的萼花臂尾轮虫的平均寿命分别为:97.33±2.56h、101.00±6.039h、97.33±2.906h、108.66±5.129 和 99.00±4.698h。轮虫的总体寿命随维生素B12浓度的增加而延长。3.不同浓度的维生素B12对萼花臂尾轮虫生命表参数的影响光照强度约为4000lx,昼长比L:D=16:8,温度25℃,以蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)为食物投喂轮虫,密度为3.0×106cells/ml。实验对净生殖率(Ro)、世代时间(T),内禀增长率(rm)等生命表参数进行研究。从实验结果中我们的得出:净生殖率(Ro)随着维生素B12浓度的上升而呈现上升趋势,各实验组0.2、0.4、0.8 和 1.0μg/ml 的净生殖率依次为 6.66±0.41、0.66±0.55、6.88±0.51 和6.39±0.57,均高于对照组的6.18±0.74。在0.8μg/ml浓度组中Ro表现出最大值:6.88±0.51。世代时间(T)和内禀增长率(rm)均较对照组相比更高,世代时间(T)除了 0.40μg/ml的68.93±0.26外均高于对照组的71.75±1.13。各实验组的内禀增长率(rm)依次为 0.03±0.001、0.03±0.007、0.03±0.001 和 0.022±0.001。内禀增长率总体的趋势是随着浓度的增加二升高,但高浓度组的增长率却有所下降但依旧高于对照组的0.02±0.001。总体而言三种生命表的参数均随着浓度的升高而上升。实验得出:在108h时,各浓度组的寿命时长出现很大分歧,在120h前均高于对照组,156h后浓度为0.2μg/ml的实验组均高于其他组,但大致走向基本相同。4.维生素B12对萼花臂尾轮虫平均后代数及繁殖前期时长的影响光照强度约为4000lx,昼长比L:D=16:8,温度25℃,以蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)为食物投喂轮虫,密度为3.0×106cells/ml。研究表明,随着维生素B12浓度的增加,萼花臂尾轮虫的平均后代数也随之增加,并且从幼体孵出到产第一枚卵所用的时间随着浓度的加大而延长。各实验组0、0.2、0.4、0.8 和 1μg/ml 的平均后代数依次为 14.50±1.40、15.33±0.60、16.00±0.23、16.67±0.36和19.83±0.19ind.。与对照组相比,0.2、0.4、0.8和1μg/ml的后代数分别增加了5.52%、10.34%、14.94%、36.78%,差异显著(p<0.05)。浓度为 1 μg/ml 浓度组的轮虫繁殖前期的时长最长,为21.00±0.34h。其余各实验组的繁殖前期的时长为 16.33±0.18、16.67±0.11、17.00±0.06h,均高于对照组的 15.67±0.30h。因此可得出结论高浓度组的维生素B12可以对轮虫的平均后代数及繁殖前期产生影响,但结合其他各实验可以看出高浓度组虽前期耗时较大,繁殖前期较长但后期维生素B12却能够有效地提高轮虫的后代数量,并保持在一个相对稳定的高度。5.雄生素B12对萼花臂尾轮虫CAT、MnSOD以及HSP60基因的表达量的影响本研究中,实时定量PCR的目的为探究维生素B12的营养强化能否提高CAT、MnSOD以及HSP60基因的表达量,从而观察维生素B12对轮虫这三个基因的抗氧化作用的影响。设置光照强度约为4000lx,昼长比L:D=16:8,温度25℃,投喂蛋白核小球藻((Chlorella pyrenoidosa)密度为3.0×106cells/mL。从实验结果分析看出,维生素B12对轮虫CAT、MnOD以及HSP60基因的表达均有促进作用,并且大致均呈现随着实验浓度上升而上升的趋势。浓度为0.2、0.4、0.8、1μg/ml的实验组轮虫CAT基因的表达量依次为3.07、2.22、6.11、7.56,轮虫体内的CAT mRNA的表达量均显著上调(P<0.05);Mn O 基因的表达量依次为5.98、6.82、6.58、10.20,轮虫体内的MnSODmRNA的表达量均显著上调(P<0.05);轮虫HSP60的基因表达量依次为5.54、9.25、11.8、8.34,轮虫体内的HSP60 mRNA的表达量也都呈现显著上调的趋势(P<0.05)。因此我们认为维生素B12能够对轮虫体内的CAT、MnSOD以及HSP60基因产生一定的刺激,使得轮虫代谢过程中的抗氧化性能有所增强,并且维生素B12的浓度越高,上升趋势越明显。这说明了在轮虫的大规模培养中添加适量的维生素B12对轮虫的种群及生命时长具有一定的影响。