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尽管P450s酶系在昆虫中的重要性已经十分清楚，但由于多型P450共存于同一昆虫体中，要真正了解和调控P450的功能，需要剖析不同P450的底物特异性，首先必须分离纯化出单型P450，因此P450分离纯化在P450研究中具有重要的意义。 棉铃虫是一种在世界范围内普遍发生的重要害虫，能导致多种不同作物的严重损失。为深入了解棉铃虫P450的结构与功能，我们就棉铃虫P450的诱导、分离纯化及性质进行了研究，主要研究结果如下。 比较萘、五甲基苯、槲皮素、芸香苷和单宁酸对棉铃虫微粒体P450含量的影响发现：萘和五甲基苯能明显诱导微粒体P450，中肠微粒体P450的含量分别提高了2.60和2.34倍，脂肪体微粒体P450的含量分别提高了2.51和3.15倍。槲皮素、芸香苷和单宁酸对脂肪体微粒体P450未表现出诱导作用，对中肠微粒体P450有一定的抑制作用，并导致棉铃虫对溴氰菊酯的敏感性增加。 对CHAPS、Lubrol PX、Emulgen 911和胆酸钠四种去垢剂的比较研究发现：CHAPS对中肠和脂肪体微粒体P450的增溶效率最高，Lubrol PX、Emulgen 911和胆酸钠较差。CHAPS增溶中肠和脂肪体微粒体P450的最适浓度分别为0.5％和0.5％或0.8％。在0.5％浓度下，四种去垢剂均未使中肠和脂肪体微粒体P450变性。 PEG沉淀法被用于P450的初步纯化。当PEG的浓度为2％时，约30％的微粒体蛋白和10％的P450被沉淀；PEG为5％时，约55％的微粒体蛋白和20％的P450被沉淀；PEG为8％时，约78％的微粒体蛋白和30％的P450被沉淀；PEG为11％时，约85％的微粒体蛋白和70％的P450被沉淀。其中，8％CHAPS适合于微粒体P450的初步纯化。经PEG沉淀后，中肠微粒体P450纯度提高了2.1倍，回收率为72％；被沉淀出的蛋白主要集中在14.4-40kDa和66-97kDa范围内。 本文建立了HPHIC（Phenyl-5PW）分离P450的优化条件：①检测波长为405nm；②流速0.5ml／min；③50min线性梯度洗脱，从100％HICA2至100％HICB。在该条件下，中肠微粒体经HPHIC分离后，P450主要存在于馏分7（tR=39′0″-44′0″）和馏分8（tR=44′01″-49′0″）中；与微粒体相比，P450纯度提高3.04倍，回收率为55.3％。 本文还建立了HPIEC（DEAE-5PW）分离P450的优化条件：①检测波长为405nm；②流速0.5ml／min；③40min线性梯度洗脱，从100％IECA2至100％IECB2。在该条件下，馏分7和馏分8中的P450均在tR=5-7min范围内洗脱出来；与微粒体比，P450纯度提高6.3倍，回收率为17.3％。 SDS-PAGE（银染）显示：经HPIEC分离后，馏分7得到分子量为59±1.0kDa和48±1.9kDa的两条蛋白带；馏分8得到分子量为55±0.2kDa和46±1.9kDa的两条蛋白带。