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本研究综合应用形态标记、细胞遗传学分析、C-分带、原位分子杂交和RAPD等几种方法,从形态学、细胞学、分子生物学等几个层次对本研究室通过远缘杂交结合电离辐射方法创制并选育的含有黑麦染色体(质)的普通小麦进行了综合鉴定。利用鉴定出的小麦-黑麦异代换系及“中国春”-长穗偃麦草二体异附加系与“中国春”-杀配子染色体二体异附加系配置了杂交组合,探讨杀配子染色体的作用。为利用杀配子染色体诱导小麦-偃麦草、小麦-黑麦的染色体易位及构建二倍体长穗偃麦草的染色体缺失系统打下基础。主要研究内容及结果如下: 1、形态学鉴定及细胞遗传学分析:在小黑麦与普通小麦远缘杂交结合电离辐射的后代中,根据田间性状选出育性正常的70个品系,经过室内考种,在2n=42的品系中选出21个育性良好的具有黑麦性状的品系及2个农艺性状良好的无明显黑麦性状的品系。对这23个选择品系进行花粉母细胞染色体行为分析表明,它们在遗传上已基本稳定,含有正常21个二价体的细胞在90%左右。对其中6个品系与普通小麦“中国春”进行了杂交,F1的花粉母细胞染色体行为分析表明,品系98-15、98-53基本上形成21个正常二价体,初步判断它们为无变异或变异很小的小片段易位系。品系98-25,98-55、98-61,大部分细胞表现为20Ⅱ+21,初步将它们确定为异代换系。品系98-32出现了一定数量的单价体和多价体,且棒状二价体频率明显增高,表明它可能是小麦—黑麦易位系。 2、C-分带鉴定:对23个选择品系进行了C-分带鉴定。结果表明,品系98-32是6AS/6RL易位系;品系98-19、98-61是5R/5A异代换系;品系98-25为1R/1D异代换系;品系98-60为5R代换与5AS/6AS易位系。品系98-28、98-57、98-58、98-59为涉及黑麦染色体的代换系或易位系。其它品系用C-分带技术没有鉴定出黑麦的染色体。本研究对C-分带的关键性技术环节及其在外源色体鉴定上的应用进行了讨论。 3、原位分子杂交鉴定;以黑麦总基因组DNA做探针,以普通小麦中国春总基因组DNA做封阻,对23个选择品系进行了原位分子杂交鉴定。结果表明,品系98-28、98-57、98-58是小麦-黑麦异代换系,98-32、98-59是易位系,易位断裂点清晰可见。结合C-分带和形态学分析结果,认定:品系98-32是T6AS·6RL易位系;98-59是T1RS-1AS·1AL易位系;品系98-28、98-57、98-58为1R/1A异代换系。同时,用原位分子杂交方法鉴定出98-25、98-60、98-61是涉及 2郭长虹 羹 耍 刀惯n年Z月 条黑麦染色体的异代换系,进一步验证了细胞邀传学分析及C-分带的腔定结果。 本研究对麦类作物分子原位分子杂交的影响因羹及其在外源染色体(质)羹定 上的应用进行了讨论. 4、RAPD标记鳖定:以普邀小麦“中困客”、“队利”腴麦、23个活择品 系及其亲本为实验材料,从46个随机引物中找到了3个赐麦染色体特异的RAPD 标记。即:OPA-01350、OPF-07。。和OPF-159。。用这些RAPD标记在已经鳖定为 易位或代换的品系中检测出了用麦染色质,进一步验证了上述络定结果。并且, 在一些用 C-分带和原位分子杂交等方法没有鉴定出结果的品系(98-二、98-3、 98-4、98-31、98-53)中,也检测到T g麦染色质,说明这些品系是涉及用麦 染色体的小片段易位系。上述结果表明,用RAPD技术鉴定沓邀小麦中的外源染 色体(质)是高效、快捷和切实可行的. 5、对应用不同技术方法鉴定普邀小麦中外源染色体(质)的必要性及可行 性进行了分析。认为不同技术领域,不同层次的坠定方法结合快用,可以发挥 各自的长处,相互印证,相互补充,从而使鳖定结果更加系统、准确.形态性 状是一切筛选的基础,遗传稳定性分析对鳖定材料的纯合佐分析是必挂的,对 于异代换及较大片段的易位可用C-分带和原位分子杂交技术鳖定,而对于小片 段易位则需借助RAPD分析等分于标记方法来鳖定。建立了一套系统地识别外濒 染色体(质)的实验程序: 形态学鳖定 一邀传稳定性分析一腹位分子杂交鳖定一C-分带鳖定~RAPD(yLP)分伍 (初步师话)(代换欧大片段易位)(小片区吕位) 6、对鉴定品系的利用价值进行了探讨。品系98-32抗白扭病,98-59抗赐( 杆强,这两个品系均为大片段易位系,性状优良,可以直接用于生产,也可以 做为进一步诱导小片段易位的资源进行利用。&系98-25、98-28、9857、98-58 都是涉及IR染色体的代换系,具有很强的抗病能力,这些品系是研究IR与抗 病性间关系及进一步创制易位系的良好材料.品系98-19、98-60、98-61都是SR 异代换系。它们槽大、粒多,是高产育种的桥梁材料。品系98-55是6R异代换 系,高抗白粉病,可以做为进一步选育抗白粉病品种的基础材料加以利用·品 系98-1、98-3、98-4、98-31、98-53等5个小片段易位系的综合农艺性状良好, 可以直接用于生产。其中品系98-1、98-31