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有丝分裂过程中,染色体的准确分离需要诸多亚细胞结构的协同运作。位于着丝粒两侧的动粒复合物是其重要的参与者之一。动粒蛋白的缺失或异常可导致纺锤体微管与染色体结合异常、染色体向两级移动过程滞后、染色体排列错误和非整倍性等灾难性后果。人源动粒复合物可分为内层动粒和外层动粒。内层动粒与组蛋白H3的变体CENP-A结合,与着丝粒区域DNA相连。内层动粒依据其功能分为五组亚复合物:CENP-C,CENP-H/I/K/M,CENP-L/N,CENP-T/W/S/X和CENP-O/P/Q/U/R。外层动粒可分为KNL1,MIS12,NDC80三组亚复合物,在连接微管和激活纺锤体检查点上发挥重要作用。近年来动粒复合物的研究获得较大进展,但其结构与组装方面仍存在许多未知。本文聚焦于内层动粒重要亚基CENP-C、CENP-H、CENP-K三种蛋白的相互作用分析与结构生物学尝试。通过分子克隆与重组表达系统,我们表达纯化了不同长度的CENP-C和CENP-K蛋白,并重组获得了CENP-H/K二元复合物及CENP-C/H/K三元复合物。通过蛋白质复合物体外重组,我们发现CENP-H与CENP-K通过二者C端可直接互作形成紧密的异源二聚体。Pull-Down结果表明,CENP-C的277-325片段是结合CENP-H/K复合物的关键序列,而CENP-H介导了CENP-H/K异源二聚体与CENP-C的直接相互作用。进一步的Pull-Down结果显示,全长二聚体CENP-H/K或C端二聚体CENP-H107-C/K85-C结合CENP-C的能力类似。这暗示着CENP-C与CENP-H/K复合物的相互作用主要依赖于CENP-H/K复合物的C端。经过相互作用分析与重组优化,我们获得了状态良好的CENP-C截短体和CENP-K蛋白质样品,以及CENP-H/K和CENP-C/H/K复合物样品。我们进行了大量晶体生长条件筛选,目前已获得CENP-C208-400/HFL/KFL三元复合物的簇状晶体,进一步的优化工作仍在进行中。本文对动粒蛋白CENP-C、CENP-H和CENP-K的相互作用的分子机制做出了有益探索,为进一步的结构与功能研究奠定了重要基础。