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目的:调节性T淋巴细胞是一群具有抑制效应性T淋巴细胞增殖及释放细胞因子作用的淋巴细胞。由于调节性T淋巴细胞在炎症发展过程中所起的重要作用,越来越多的疾病被发现与其相关,特别是自身免疫系统疾病,例如系统性红斑狼疮、多发性硬化、炎症性肠病等疾病。FOXP3是交叉头螺旋转录因子家族成员之一,在调节性T淋巴细胞发育及发挥功能方面起到了重要的作用。本研究选择CD4和FOXP3作为调节性T淋巴细胞的特异性标记物,分别从蛋白质和mRNA水平观察调节性T淋巴细胞在炎症性肠病患者外周血及炎症损伤部位的表达情况,目的在于了解调节性T淋巴细胞与炎症性肠病发病机制间的关系。
方法:收集正常人外周血标本15例、炎症性肠病患者外周血标本62例(其中CD31例,UC31例),流式细胞技术检测外周血CD4+FOXP3+调节性T淋巴细胞的含量。免疫组织化学法检测11例正常结肠粘膜组织和72例炎症性肠病患者炎症部位活检粘膜组织中(CD31例,UC41例)FOXP3阳性细胞数,同时使用免疫荧光双染技术检测活检标本中FOXP3与CD3的共表达情况。Real-time PCR检测86例炎症性肠病患者外周血和炎症损伤部位(CD43例,UC43例)中FOXP3mRNA在的表达。Western-blot检测了27例(CD14例,UC13例)炎症性肠病患者及健康体检者肠粘膜活检组织中FOXP3蛋白道的表达。
结果:1、炎症性肠病患者外周血中调节性T淋巴细胞的含量比正常人(5.08±1.66%,P<0.05)明显减少。缓解期CD病人外周血中调节性T淋巴细胞的含量较活动期患者升高但两者之间无明显统计学差异(3.99±2.05% vs3.59±1.55%,P>0.05),在。UC患者外周血中也发现了类似的结果(4.22±1.29% vs3.51±1.6%,P>0.05)。炎症性肠病患者的疾病活动期评分与外周血的调节性T淋巴细胞含量之间无显著差异。2、炎症性肠病患者外周血当中FOXP3 mRNA和正常对照组间无明显差异;但在肠粘膜活检组织中FOXP3 mRNA的表达水平却明显高于正常对照组(P<0.05),且以活动期患者(P<0.01)尤为明显。3、FOXP3蛋白在炎症性肠病患者肠粘膜活检组织中的表达较正常对照组明显升高(P<0.05),且以活动期UC患者最为显著。4、免疫组化的结果显示,FOXP3阳性细胞在炎症性肠病患者肠粘膜活检组织中较正常对照组相比明显增加(P<0.001),但是随着病情的活动FOXP3阳性细胞并未随之增加反而有所减少。免疫荧光双染结果表明绝大多数FOXP3阳性细胞同时有CD3的表达。
结论:CD4+FOXP3+调节性T淋巴细胞在炎症性肠病患者外周血中明显减少,且在疾病活动期时更加明显,这有可能是导致疾病发作的重要原因之一。在肠粘膜活检组织中FOXP3在mRNA和蛋白质水平的表达均明显升高。虽然调节性T淋巴细胞在炎症性肠病患者肠道粘膜内明显增加但是仍然没能阻止疾病的进展。这些结果表明调节性T淋巴细胞在数量和功能上的异常有可能是导致疾病发展的重要原因之一。