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朝药泽兰为唇形科(Lamiaceae)地笋属(Lycopus)多年生草本植物毛叶地瓜儿苗Lycopus lucidus Turcz.var.hirtus Regel的干燥地上部分。泽兰具有抗菌、抗炎等药理作用,有待于深入研究与探索。本实验以抗菌活性为导向,分离具有抗菌作用的单体化合物为目标,为泽兰进一步的开发奠定基础。本次实验使用甲醇对泽兰进行回流提取,将浓缩的浸膏用石油醚和乙酸乙酯依次萃取后,利用羟丙基葡聚糖凝胶色谱法、硅胶柱层析法和反相硅胶柱层析法等多种色谱手段对抗菌活性较好的乙酸乙酯萃取物进行分离纯化。运用多种波谱学方法共鉴定出22种化合物,分别为:β-谷甾醇(1)、羽扇豆醇(2)、白桦脂醛(3)、白桦酸(4)、乌苏酸(5)、蔷薇酸(6)、齐墩果酸(7)、芹菜素(8)、木犀草素(9)、反式肉桂酸(10)、4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(11)、对羟基苯甲酸(12)、3,4-二羟基苯甲酸(13)、3,4-二羟基苯甲醛(14)、(+)-(R)-迷迭香酸(15)、(+)-(R)-methyl rosmarinate(16)、(+)-(R)-methyl rosmarinate and(-)-(S)-methyl rosmarinate(17)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、Scutellarin(20)、芸香苷(21)、硬脂酸(22)。其中化合物 2、3、6、10、11、12、17为首次从泽兰中分离得到。将化合物进行抗菌活性测试,发现化合物2~9、14~19和22共15种化合物表现出一定的抗菌活性,化合物17的抗菌活性为首次报道。最小抑菌浓度(MIC)的测试结果显示,化合物9、16和17对大肠杆菌(1924)和耐喹诺酮金黄色葡萄球菌(3519)具有较强的抑制作用,MIC值为4~16μg/mL。其中化合物9对多种细菌具有较强的抑制作用,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(3167)及金黄色葡萄球菌(503)、(209)的MIC值均为4 μg/mL;对蜡状芽孢杆菌(1661)抑制作用良好,其MIC值为16μg/mL。化合物15、16和18对耐喹诺酮金黄色葡萄球菌(3505)的活性良好,MIC值可达到16~32 μg/mL。化合物15对枯草芽孢杆菌(1021)及化合物17对蜡状芽孢杆菌(1661)的抑菌活性良好,其MIC值均为16μg/mL。化合物9、16和18对白色念珠菌(7535)表现出抑制作用,MIC值均为64 μg/mL。化合物5对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(3167)、耐喹诺酮金黄色葡萄球菌(3519)及大肠杆菌(1924)的MIC值均为32 μg/mL。化合物5、6、7、14、18和19的最低杀菌浓度(MBC)值小于4倍MIC,表明这些化合物对细菌不易产生耐药性。通过细菌生长曲线实验发现,化合物9、16可明显抑制大肠杆菌(1924)的生长,其抑菌活性随用药浓度的升高而增强。现今药典中并未收录泽兰含量标准的相关数据,而分离过程中发现化合物4和15的成分较多,故利用HPLC对这两种化合物同时进行含量测定实验,为药典中泽兰的含量标准提供参考。在0.02~1 mg/mL浓度区间内,化合物4呈良好的线性关系,为 Y=3609X+17374(R2=0.9997);在 0.001~0.03 mg/mL 浓度范围内,化合物15的回归方程为Y=31992X-8037.8(R2=0.9996)。两种化合物方法学验证中的精密度考察、稳定性研究及重复性试验的RSD均小于2%(n=6),加样回收率为在98%至102%之间(RSD=0.18%和0.23%)。因此,可证实HPLC法能够准确地同时测定泽兰中化合物4和15的含量。结果显示,化合物4和15在泽兰中的含量分别为36.8 mg/g和11.4 mg/g。