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目的:探讨激光微孔联合反复冻融脱细胞方法制备的激光微孔脱细胞猪真皮支架对大鼠Ⅲ度皮肤烧伤创面愈合作用及血管化的影响,为临床提供理想的真皮支架材料。方法:第一步:采用激光打微孔+低浓度胰蛋白酶+反复冻融+恒温振荡制备的异种脱细胞猪真皮基质,HE染色检测;第二步:将制备的激光微孔异种脱细胞猪真皮和普通打孔异种脱细胞猪真皮进行皮下埋植实验。具体方法:24只300g左右成年雄性无病原体级SD大鼠,将两种真皮基质分别埋植于SD大鼠背部左右两侧皮下,术后3天、1周、2周和3周掀开皮瓣进行真皮基质HE染色和CD31免疫组化染色标记。第三步:复合皮移植实验。具体方法:72只300g左右成年雄性无病原体级SD大鼠,依据真皮移植物的不同,分为激光微孔脱细胞猪真皮(A组)、普通打孔脱细胞猪真皮(B组)两种真皮支架分别移植至Ⅲ度烧伤清创后创面,另一组创面清创后仅覆盖油纱(C组),术后1周在异种猪真皮(A和B组)或者肉芽上(C组)植入表皮,大体观察植入真皮支架1、2、3周创面的修复情况,并通过HE染色和免疫组化标记创面中CD31、α-SMA表达阳性血管并计数。结果:制备的脱细胞猪真皮呈瓷白色,有光泽,柔软;显微镜下未见细胞残留,真皮胶原结构完整。皮下埋植实验3周结果显示:真皮基质与大鼠受皮组织相容性好,无排斥反应;CD31标记的阳性血管数:术后3天两组无明显差异(P>0.05),埋植术后1周、2周和3周,微孔组表达阳性血管数均明显多于普通孔组,差异具有统计学意义(P<0.01)。复合皮移植实验结果:两组脱细胞真皮支架及无支架对照组植入后1~3周创面中CD31、α-SMA表达阳性血管数均持续增加,其中A组显著高于B、C组(P<0.01),B组显著高于C组(P<0.01);真皮支架植入一周后在真皮上植入表皮,表皮移植后一周A组表皮融合成片,B组表皮散在存活皮片生长情况好;术后3周A组表皮皮片融合成片,支架已与创面完全结合;B组表皮开始融合,皮片生长良好,支架与基底结合紧密。结论:1.本实验研究的脱细胞方法脱细胞彻底,基本上达到了祛除所有含抗原成分细胞的效果,真皮支架三维胶原结构完整。2.本研究制备的激光微孔与普通打孔异种脱细胞猪真皮基质与受皮组织相容性好,无免疫排斥反应,均能血管化,但微孔组血管化速度明显快于普通打孔组。3.复合皮移植实验证实,本实验制备的激光微孔脱细胞猪真皮基质能快速血管化,为表皮提供良好营养供应,利于表皮存活,是较为理想的生物支架材料。对于Ⅲ度烧伤的皮肤损伤创面修复具有良好的效果,作为真皮支架具有很好的前景。