干扰Rab27A基因对胃癌细胞SGC7901生物学行为的影响

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目的:失控性体外增殖、迁移和侵袭能力是肿瘤细胞的基本生物学特性,这与基因的异常表达有着密切的关系。前期的研究结果显示,Rab27A基因在胃癌及癌旁正常组织中呈现差异性表达,并且其表达水平与患者临床病理学特征及预后有明确的相关性。这就提示Rab27A基因很可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。但是,Rab27A基因对胃癌细胞恶性生物学特性的影响还有待深入研究。目的:研究干扰Rab27A基因对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。  方法:应用Western Blot技术验证Rab27A基因在8对胃癌及癌旁组织中的差异性表达。采用RT-PCR和Western Blot技术检测5个胃癌细胞系及1个永生化细胞系中Rab27A基因的表达水平,并从中筛选Rab27A高表达细胞株;以高表达Rab27A基因的SGC7901细胞为研究模型,通过细胞转染,G418筛选,获得候选RNA干扰稳定细胞株,并通过RT-PCR,Western blot及免疫荧光标记等技术进行验证;再经过MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂集落形成实验和Transwell实验观察干扰Rab27A后SGC7901细胞增殖,迁移及侵袭等生物学行为的改变。  结果:实验结果表明,与癌旁正常组织相比,Rab27A基因在胃癌组织中呈现低表达(7/8,87.5%);在5个胃癌细胞系和1个永生化细胞系中Rab27A基因呈现差异性表达。选择高表达Rab27A基因的SGC7901细胞为研究模型,转染RNAi-2/3干扰质粒抑制SGC7901细胞中Rab27A mRNA和蛋白的表达。Rab27A干扰稳定细胞株干扰效率鉴定结果:与Vector相比,RNAi-2/3表达量明显下降。MTT实验、平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验结果显示,干扰Rab27A对胃癌细胞SGC7901的细胞生长曲线、克隆形成数量及克隆形成大小没有显著影响(P>0.05)。Transwell实验结果表明,干扰Rab27A表达后的细胞穿过基膜或基质胶的数量明显增多(P<0.05),细胞的迁移和侵袭能力显著提高。  结论:综上所述,Rab27A在5个胃癌细胞系及1个永生化细胞系中呈现差异性表达;Rab27A基因对胃癌细胞的生物学特性有重要影响,其干扰后可以增强胃癌细胞的迁移和侵袭能力,却不影响胃癌细胞的增殖能力。这也提示在胃癌中Rab27A很可能是一种抑癌基因,可以作为潜在的肿瘤预后标记物,为今后的临床诊断治疗及预后提供重要的参考价值。至今为止,人们对于肿瘤的认识非常有限,更多的基因、效应因子、信号通路以及分子机制仍需被发现。这不仅可以提升对胃癌机理的认识,同时还可以为胃癌的临床治疗提供新的靶点和策略。
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