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贮藏蛋白2(StorageProtein2,SP2)是家蚕幼虫血淋巴中一种含量较高的可溶性蛋白,是家蚕生长发育过程中重要的能源物质,因此被称为贮藏蛋白。已有研究结果表明,SP2不仅可以作为能源物质在家蚕变态发育过程中提供能量,它还具有抗细胞凋亡的功能,但目前有关其抗凋亡活性的研究报道还很少。血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cells,VEC)凋亡是引发动脉粥样硬化的重要原因之一。因此,研究SP2对血管内皮细胞凋亡的抑制活性,对治疗动脉粥样硬化等心血管疾病可能具有重要意义。我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中克隆了sp2基因(GenBank登录号:DQ443358),生物信息学分析结果表明,该序列含一个2112 bp的开放阅读框,编码703个氨基酸残基;预测蛋白分子量为83.45 kDa,等电点为5.7。将PCR扩增获得的sp2基因片段插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-sp2,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白,免疫雄性新西兰兔制备多克隆抗体。经ELISA检测,抗体效价可达1:6400,Western blot结果显示抗体的特异性良好。通过对SP2在家蚕各发育时期和家蚕五龄幼虫各组织中特异性分布情况分析,发现SP2在蛹期和五龄幼虫的血淋巴、脂肪体中含量较高,而在卵及蛾期含量很低。亚细胞定位结果表明该蛋白主要存在于细胞膜上,少部分存在于细胞质中。为进一步研究SP2对人血管内皮细胞凋亡的抑制作用,我们利用Bac-to-Bac系统构建了重组病毒Bacmid-sp2,转染家蚕BmN细胞,大量表达了带有6×His标签的融合蛋白SP2,Western blot检测结果显示SP2在家蚕细胞中成功表达。利用镍柱亲和层析的方法纯化目的蛋白,将纯化的SP2作用于星孢菌素诱导凋亡的人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),MTT检测结果表明,SP2能明显增强HUVEC的活力;进一步利用ELISA法检测DNA片段化程度并利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果均表明SP2对星孢菌素诱导的HUVEC凋亡具有一定的抑制作用。