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目的：
探讨乌司他丁对脓毒症诱导血管内皮细胞损伤的作用及其机制。
方法：
体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，将HUVEC接种于transwell培养板上层小室，建立完整的内皮细胞单层模型。随机分成正常血清组、PBS组、脓毒症组、人重组基质金属蛋白酶－9(MMP9)组、脓毒症+乌司他丁(UTI)组、MMP9+UTI组共六组。正常血清组、PBS组、脓毒症组是在transwell上层小室内分别加入正常血清、PBS液、脓毒症血清，最终浓度均为10％，MMP9组transwell上层小室内加入等体积的MMP9稀释液，使其最终浓度1ug/ml，脓毒症+UTI组、UMP9+UTI组分别加入脓毒症血清、MMP9稀释液(剂量同脓毒症组和MMP9组)，补充DMEM培养液培养24小时后，弃掉培养液，于上层小室内加入乌司他丁，使其最终浓度1000u/ml，其他四组加入等体积PBS液，然后进行如下操作：1、各组上层小室内加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖(40KD)，浓度为10ug/ml，补充培养液继续培养24小时后，从上、下室抽取培养液应用荧光光谱仪检测FITC的荧光发射强度，通透性以下室荧光强度/(上室荧光强度×面积×时间)×100％表示，观察乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞通透性的影响；2、补充培养液继续培养24小时后，采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测各组transwell上下层小室内培养液中可溶性血管钙黏蛋白(VE-cadherin)浓度，观察乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞可溶性VE-cadherin浓度的影响；3、补充培养液继续培养24小时后，采用免疫印迹法(Westernblot)和免疫荧光法检测VF-cadherin、claudin-5和ZO-1蛋白含量，分析乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞连接蛋白VE-cadherin、claudin-5和ZO-1表达的影响。
结果：
1、检测乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞通透性的影响：正常血清组血管内皮细胞通透性为1.00±0.16(％.cm-2.h-1)；脓毒症组血管内皮通透性为1.78±0.13(％.cm-2.h-1)，显著高于正常血清组(P<0.001)；脓毒症+UTI组血管内皮细胞通透性为1.23±0.28(％.cm-2.h-1)，显著低于脓毒症组(P<0.001)。PBS组血管内皮细胞通透性为0.94±0.57(％.cm-2.h-1)；MMP9组血管内皮细胞通透性为3.35±0.56(％.cm-2.h-1)，明显高于PBS组(P<0.001)；MMP9+UTI组血管内皮细胞通透性为1.80±0.34(％.cm-2.h-1)，显著低于MMP9组(P<0.001)。
2、检测乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞可溶性VE-cadherin浓度的影响：(1)正常血清组transwell培养板上层小室可溶性VE-cadherin浓度3.84±0.31ng/ml，正常血清组下层小室可溶性VE-cadherin浓度3.08±1.48ng/ml；(2)脓毒症组上层小室可溶性VE-cadherin浓度5.03±0.40ng/ml，明显高于正常血清组(P<0.001)，脓毒症组下层小室可溶性VE-cadherin浓度4.82±1.05ng/ml，明显高于正常血清组(P=0.001)；(3)脓毒症+UTI组上层小室可溶性VE-cadherin浓度4.44±0.44ng/ml，明显低于脓毒症组(p=0.001)，脓毒症+UTI组下层小室可溶性VE-cadherin浓度3.78±0.91ng/ml，明显低于脓毒症组(p=0.036)；(4)PBS组上层小室可溶性VE-cadherin浓度3.83±0.42ng/ml，PBS组下层小室可溶性VE-cadherin浓度3.24±1.24ng/ml；(5)MMP9组上层小室可溶性VE-cadherin浓度5.02±0.40ng/ml，明显高于PBS组(p<0.001)，MMP9组下层小室可溶性VE-cadherin浓度4.92±1.05ng/ml，明显高于PBS组(p=0.001)；(6)MMP9+UTI组上层小室可溶性VE-cadherin浓度4.41±0.37ng/ml，明显低于MMP9组(P=0.001)，MMP9+UTI组下层小室可溶性VE-cadherin浓度3.85±1.04ng/ml，明显低于MMP9组(P=0.033)。
3、通过Westernblot法观察乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞连接蛋白VE-cadherin、claudin-5和ZO-1表达的影响：与正常血清和PBS对照组相比，脓毒症组、MMP9组VE-cadherin、claudin-5和ZO-1蛋白表达量明显减少，脓毒症+UTI组、MMP9+UTI组VE-cadherin、claudin-5和ZO-1的表达量比脓毒症组、MMP9组明显增加。
4、通过免疫荧光法观察乌司他丁对脓毒症血管内皮细胞连接蛋白VE-cadherin、claudin-5和ZO-1表达的影响：正常血清组及PBS组VE-cadherin、claudin-5和ZO-1等蛋白的荧光图案连续，脓毒症组、MMP9组VE-cadherin、claudin-5和ZO-1蛋白的荧光图案出现明显断裂，荧光颗粒明显减少，脓毒症+UTI组、MMP9+UTI组VE-cadherin、claudin-5和ZO-1蛋白的荧光图案比脓毒症组、MMP9组更连续，荧光颗粒明显增加。
结论：
乌司他丁对脓毒症诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用，其机制可能是通过抑制MMP9，对脓毒症中多种炎性因子的进行调节，避免脓毒症的过度炎症反应造成的细胞连蛋白脱落和表达量下降，减轻脓毒症引起的血管内皮细胞通透性的升高。