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牙周炎是以牙周袋形成、袋壁炎症、牙槽骨吸收、牙齿松动为主要特征的口腔科常见病，多发病，牙周炎不仅导致成年人牙齿过早丧失，并可导致和诱发各种全身性疾病，严重影响健康。根治牙周炎的关键是通过成骨细胞和破骨细胞的调节作用阻止牙槽骨吸收或促进牙槽骨的再生。我科应用补肾活血固齿方治疗牙周炎，疗效显著，但其作用机理不明了。骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Proteins, BMPs)是骨修复中最主要的诱导因子，有20多种亚型，其中BMP2的诱导成骨能力较为明显，BMP2通过Smads和p38MAPK信号通路促进成骨细胞表达多种特异性基因如Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP）、骨钙素，产生相应蛋白分泌到细胞外基质中，使细胞外基质矿化，进而完成成骨。钙离子通道TRPV5/TRPV6通过调节成骨细胞内钙离子含量的变化,激活p38MAPK通路，促进成骨细胞分化过程。ALP是成骨细胞早期分化的标志酶，它的活性可以代表成骨细胞的分化活性和成骨细胞的分化水平。目的：补肾活血固齿方灌胃大鼠一周，取大鼠含药血清，作用小鼠颅顶前成骨细胞（MC3T3-E1细胞），观察药物对MC3T3-E1细胞形态、增殖、ALP活性，BMP2表达及TRPV5/TRPV6通道的影响，探讨补肾活血固齿方成骨的作用机制。方法：1MC3T3-E1细胞的培养。2补肾活血固齿方按体表面积折算等效剂量灌胃大鼠，制备含药血清；等量生理盐水灌胃大鼠，制备无药血清作为对照组，10%胎牛血清为空白对照组。3用10%含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞48h、72h，倒置显微镜下观察补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态的影响。4MTT法检测补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响。10%胎牛血清组、无药血清组、含药血清组（分别含有5%、10%、15%、20%含药血清），分别培养MC3T3-E1细胞，MTT法检测12h、24h、36h、48h、60h、72h补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响。5检测补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响。10%含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞，检测24h、48h、72h时MC3T3-E1细胞中ALP的含量。6RT-PCR法检测补肾活血固齿方MC3T3-E1细胞BMP-2及TRPV5/TRPV6mRNA表达影响。10%含药血清、无药血清培养MC3T3-E1细胞，RT-PCR法检测24h、48h、72h的BMP2、TRPV5/TRPV6mRNA的表达。结果：1补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态的影响结果显示补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态无明显影响2补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖的影响结果显示含药血清对细胞的增殖无明显影响（P＞0.05）3补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞中ALP活性的影响结果显示MC3T3-E1细胞经含药血清、无药血清、胎牛血清组作用后，含药血清的ALP活性较胎牛血清、无药血清增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示时间依赖效应。4补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞BMP2mRNA表达的影响。结果显示含药血清组的BMP2mRNA表达量较无药血清组增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示时间依赖效应。5补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞TRPV5/TRPV6mRNA的表达的影响结果显示含药血清组的TRPV6mRNA表达量较无药血清增加，有统计学差异（P＜0.05），并且药物作用效果显示出时间依赖效应。含药血清和无药血清中MC3T3-E1细胞均未检测到TRPV5mRNA的表达。结论：补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态无影响；对MC3T3-E1细胞增殖活性无明显影响；可时间依赖性增加MC3T3-E1细胞的ALP活性；可提高MC3T3-E1细胞BMP2，TRPV6mRNA表达水平。补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响；补肾活血固齿方通过上调BMP-2mRNA的表达，诱导成骨细胞分化；通过钙离子通道TRPV6促进成骨细胞分化。