β<,2->肾上腺素能激动剂(简称β<,2->激动剂)中有一类人工合成激素类药物,如Clenbuterol(克伦特罗)、Salbutamol(沙丁胺醇)等,临床上用于治疗哮喘和支气管痉挛等相关疾病.β<,2->激动剂能与细胞膜上的β<,2->肾上腺素能受体(β<,2->adrenergic receptor,β<,2->AR,简称β<,2->受体)结合,激活与受体偶联的腺苷酸环化酶,改变细胞代谢过程,刺激脂肪组织释放脂肪酸,增加蛋白质合成,从而有增强肌肉,减少脂肪的生理效应.这一特点使它们常被用作生长促进剂而添加于饲料中,以提高家畜的瘦肉率(俗称瘦肉精).中国农业部在1997年3月严令禁止β<,2->激动剂在动物饲养中的应用.但目前国内非法使用情况仍非常严重,因此迫切需要建立快速、灵敏、特异的β<,2->激动剂的检测方法,防止β<,2->激动剂滥用.根据β<,2->激动剂与β<,2->受体相结合产生生物学效应的原理,我们试图建立一种新的检测系统—受体-配体检测系统,即利用酶标记β<,2->激动剂与β<,2->受体竞争性结合反应来检测样品中的β<,2->激动剂.由于在体内β<,2->激动剂行使功能是通过β<,2->受体介导,所以理论上此检测系统可能检测所有的β<,2->激动剂.在建立受体-配体检测系统中,本项课题试图解决两个主要技术难点:1、合成酶标记β<,2->激动剂(克伦特罗).我们在克伦特罗交联辣根过氧化物酶时引入一13个原子长度的连接臂(space arm),克服了酶标记克伦特罗与β<,2->受体结合的空间位阻问题.2、构建重组载体并表达β<,2->受体.从人血中PCR扩增β<,2->受体基因,克隆并构建表达载体pPICZ α-Adr,经电转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和抗生素Zeocin浓度梯度筛选,获得β<,2->受体表达重组菌株.上述工作为建立β<,2>受体-配体检测系统打下了良好的基础.