众所周知,心血管疾病已经成为公认的全球第一杀手,动脉粥样硬化是最常见的心血管疾病之一,在我国的发病率也逐年增高,已经成为导致成年人死亡的主要诱因。动脉粥样硬化是以脂质代谢失调为主,在其他多种慢性应激因素共同作用下,导致血管内皮功能损伤,进而形成的慢性非特异性血管性疾病。大量临床统计资料显示：人和动物的动脉粥样硬化斑块中出现大量鞘磷脂蓄积,同时证实人血浆鞘磷脂水平和鞘磷脂/卵磷脂比例与冠心病的发生率密切相关。因此,鞘磷脂的调控有望实现动脉粥样硬化的治疗。血浆鞘磷脂水平与脂蛋白代谢以及动脉粥样硬化的发生有密切关系。鞘磷脂合成酶处于鞘磷脂体内合成路径上的最后一步,能够催化神经酰胺和卵磷脂生成鞘磷脂和甘油二酯,从而控制着细胞内鞘磷脂、神经酰胺、甘油二酯和卵磷脂的含量,进而直接影响到动脉粥样硬化的病理进程。因此,基于鞘磷脂合成酶为作用靶点的抗动脉粥样硬化研究及其抑制剂的研发,已成为该领域新的研究热点之.从中草药中寻找抗动脉粥样硬化的有效药物一直备受关注,因此研究中医药抗动脉粥样硬化的机制,从细胞和分子水平开展前瞻性的基础实验研究,可望给动脉粥样硬化及动脉粥样硬化相关性疾病的中医药治疗带来突破性进展。现代药理学研究显示,与细胞膜上的受体或通道结合是药物发挥作用的第-步,因此药物与细胞结合是药物能够发挥作用的重要步骤。基于这一原理,以细胞膜为固定相的细胞膜色谱,以及以相关受体和抗体为固定相的亲和色谱已经被用于药理学研究,对药物活性成分进行快速的分离和鉴定传统中草药虎杖为蓼科植物虎杖(polygonum cuspidatum sieb. et zucc.)的干燥根茎和根。临床用于治疗动脉粥样硬化、高血压、咳嗽以及化脓性皮炎。本课题结合肝细胞膜模型和高表达鞘磷脂合酶的活细胞提取法对虎杖抗动脉粥样硬化活性成分进行了初步筛选。论文第一部分我们建立了中药虎杖提取液的高效液相色谱测定法。采用YMC-Pack ODS-A (250×4.6 mm I.D.,5 μm)色谱柱,0.5%乙酸水溶液-乙腈流动相梯度洗脱290nm紫外检测的分析方法,进行了虎杖提取液中组分的分离与测定。并对购买到的9种单体进行了方法验证。通过对线性范围,检测限、定量限,精密度,准确度,重复性和稳定性的考察,显示建立的方法灵敏度高,专属性强。由于对照品的限制,我们又采用超高压液相色谱高分辨二级质谱联用的方法,进一步对虎杖中相关组分进行确证,结合对照品及质谱方法共确定出虎杖提取液14种组分。限于提取方法和药物浓度限制,本文对提取液中检测出的11种组分进行了较为详细的研究。论文第二部分我们选择大鼠肝细胞膜作为筛选模型,对虎杖提取物中的潜在活性成分进行筛选,通过分析比较虎杖提取物与肝细胞膜作用前后的结果,根据色谱图中组分峰面积的变化情况判断药物与肝细胞膜的作用程度,由此筛选出能与肝细胞膜结合的组分,预测虎杖的活性成分。采用上述方法对虎杖提取物中组分进行研究,共鉴定出11种组分可以与肝细胞膜特异性结合：分别是3,5,4’-三羟基二苯乙烯-3-O-(6”-没食子酰基)-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖昔、大黄素-8-0-(6’-丙二酰基)-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-(6’-乙酰基)-葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄素和大黄素甲醚。为提高筛选特异性,进一步确证虎杖中的抗动脉粥样硬化活性成分,论文第三部分我们选择了高表达鞘磷脂酶的细胞作为筛选模型,结合活细胞提取方法对虎杖中潜在活性成分进行筛选。活体细胞在适宜条件下与虎杖提取物相互作用,潜在的活性成分会与细胞结合或进入细胞,通过反复洗涤除去表面吸附的组分后,在超声条件下使细胞变性,提取出与其作用的组分,进行分离和鉴定。从中鉴定出八个组分,分别是：虎杖苷、3,5,4‘-三羟基二苯乙烯-3-O-(6“-没食子酰基)-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、白藜芦醇、大黄素-8-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚。活细胞条件更加接近机体中的环境,以上结果进一步验证了细胞膜模型的筛选结果。其中化合物虎杖苷,白藜芦醇,大黄素-8-β-D-葡萄糖苷,大黄素,大黄素甲醚已有文献报道具有抗动脉粥样硬化作用,这与我们的实验结果相吻合。