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目的：通过建立支气管哮喘模型,运用分子生物学技术检测哮喘小鼠和人胚肺成纤维细胞中易感基因ADAM33、MMPs/TIMPs及转录因子ETS-1的表达,以及固本防哮饮干预后上述指标的变化,从气道重塑的角度,研究固本防哮饮防治儿童支气管哮喘的作用机制。方法：体内实验研究：用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏和激发联合呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)感染的方法,建立BALB/c小鼠哮喘模型,采用不同剂量的固本防哮饮和孟鲁司特钠进行干预。采集小鼠血清、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)和肺组织。采用苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining, HE staining)、过碘酸雪夫染色(Periodic Acid-Schiff staining, PAS staining),马松三色染色(Masson’s trichrome staining)观察小鼠肺组织炎症、黏液分泌和胶原沉积等情况。ELISA技术检测各组小鼠血清中IgE的水平、BALF中IL-12、TGF-β1的水平以及肺组织中IL-1β的水平。real-time RT-PCR技术检测各组小鼠肺组织中IL-6、IL-13、TGF-β1、IL-1β、 ADAM33、ETS1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达情况。Western Blot技术检测各组小鼠肺组织中ADAM33、ETS-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和 TIMP-2蛋白表达情况。Envision法免疫组织化学技术检测各组小鼠肺组织中ADAM33、ETS-1、 MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白分布及表达情况。体外实验研究：制备固本防哮饮含药血清,用Th2型细胞因子IL-4刺激人胚肺成纤维细胞(HFLFs), MTT法检测IL-4对HFLFs细胞增殖的影响及固本防哮饮含药血清对HFLFs细胞增殖的作用。IL-4刺激HFLFs细胞24 h后,采用固本防哮饮和孟鲁司特钠含药血清进行干预,24 h后收集细胞。real-time RT-PCR技术检测各组HFLFs细胞中ADAM33、ETS-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达；Western Blot技术检测各组HFLFs细胞中ADAM33、ETS-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达；免疫荧光技术检测ADAM33、ETS-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白在HFLFs细胞的定位及相对表达。结果：1.固本防哮饮对哮喘小鼠肺部炎症、气道黏液分泌及胶原沉积的影响与正常组比较,模型组小鼠肺部病变明显,支气管腔及伴行的血管周围有以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,肺泡上皮细胞脱落,平滑肌厚度增加,纤维结缔组织增生。气道上皮可见杯状细胞增生,黏液过度分泌,胶原纤维显著增加,甚至有小血管形成。固本防哮饮不同剂量组及孟鲁司特钠组小鼠肺部炎症减轻,杯状细胞增生和黏液分泌减少,胶原纤维也减少。孟鲁司特钠组与固本防哮饮不同剂量组之间无差异。2.固本防哮饮含药血清对HFLFs细胞增殖的影响IL4对HFLFs的增殖有促进作用,在一定的范围内呈浓度依赖性。固本防哮饮或孟鲁司特钠含药血清对HFLFs细胞的增殖有抑制作用,从5%-20%呈浓度依赖性。3.固本防哮饮对哮喘易感基因ADAM33的影响模型组小鼠肺组织中ADAM33 mRNA和蛋白的表达量显著高于正常组,与模型组相比,固本防哮饮不同剂量组及孟鲁司特钠组小鼠肺组织中ADAM33 mRNA和蛋白的表达量均明显下降。ADAM33蛋白主要分布于支气管管壁。IL-4作用后,模型组HFLFs细胞中ADAM33 mRNA和蛋白的表达量显著升高,固本防哮饮组和孟鲁司特钠组HFLFs细胞中ADAM33 mRNA和蛋白的的表达降低,固本防效饮对ADAM33蛋白的下调作用不明显。ADAM33蛋白主要在HFLFs细胞中细胞膜和细胞质中表达。4.固本防哮饮对转录因子ETS-1的影响模型组小鼠肺组织中ETS-1 mRNA和蛋白的表达量显著高于正常组,与模型组相比,固本防哮饮不同剂量组及孟鲁司特钠组小鼠肺组织中ETS-1 mRNA和蛋白的表达量均明显下降。ETS-1蛋白主要分布于支气管管壁。IL-4作用后,模型组HFLFs细胞中ETS-1 mRNA和蛋白的表达量显著升高,固本防哮饮组和孟鲁司特钠组HFLFs细胞中ETS-1 mRNA和蛋白的的表达降低。ETS-1蛋白主要在HFLFs细胞中细胞膜和细胞质中表达。5.固本防哮饮对MMPs/TIMPs的影响模型组小鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达量显著高于正常组；与模型组相比,孟鲁司特钠组及固本防哮饮不同剂量组小鼠肺组织中MMP-2、TIMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达量均明显下降,其中固本防哮饮高剂量组TIMP-2蛋白的下降不明显。MMP-2、TIMP-2和TIMP-1蛋白主要分布于支气管管壁,而MMP-9蛋白分布于广泛肺组织。与正常组比较,模型组小鼠肺组织MMP-2/TIMP-2在mRNA水平明显降低,与模型组相比,孟鲁司特钠组MMP-2/TIMP-2降低,固本防哮饮不同剂量组种MMP-2/TIMP-2升高。与正常组比较,模型组小鼠肺组织中MMP-9/TIMP-1在mRNA水平明显降低,与模型组相比,孟鲁司特钠、固本防哮饮中剂量组及高剂量组中MMP-9/TIMP-1升高,固本防哮饮低剂量及预防组无差异。IL-4刺激后,HFLFs细胞中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达较正常组升高,固本防哮饮组和孟鲁司特钠组HFLFs细胞中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、 TIMP-2 mRNA和蛋白的表达降低,其中孟鲁司特钠对TIMP-2 mRNA的下调作用不明显。MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白主要表达于HFLFs细胞的细胞膜和细胞质。IL-4刺激后,在mRNA水平上,HFLFs细胞中MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2升高；孟鲁司特钠组和固本防哮饮组中MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2降低。6.固本防哮饮对哮喘相关细胞因子的影响与正常组比较,模型组小鼠血清中总IgE、BALF中TGF-β1及肺组织中IL-1p的平均浓度显著升高；与模型组相比,孟鲁司特钠组及固本防哮饮不同剂量组小鼠总IgE、TGF-β1、IL-1β的平均浓度均明显下降。模型组小鼠BALF中IL-12平均浓度显著低于正常组,与模型组比较,孟鲁司特钠组小鼠BALF中IL-12的平均浓度显著升高,固本防哮饮各剂量组的IL-12平均浓度高于模型组,低于孟鲁司特钠组,但无差异。OVA致敏激发和RSV感染后,模型组小鼠肺组织中IL-6、IL-13、IL-1β、TGF-β1 mRNA的表达量显著高于正常组,与模型组相比,孟鲁司特钠组及固本防哮饮不同剂量组小鼠肺组织中IL-6、 IL-13、IL-1β、TGF-β1 mRNA的表达量均明显下降。结论：1.固本防哮饮能明显减轻哮喘小鼠肺部炎症,减少肺泡上皮细胞脱落,减轻纤维结缔组织增生,减少杯状细胞增生和分泌黏液,减少胶原在网状基底膜的沉积。2.OVA致敏激发和RSV的感染能诱导哮喘易感基因ADAM33的表达,IL-4也能诱导ADAM33的表达,固本防哮饮能降低ADAM33的表达,降低机体对哮喘的易感性,这可能是固本防哮饮改善患儿肺脾肾不足体质状态的机制之一。3.OVA致敏激发和RSV感染、IL-4的刺激均能诱导转录因子ETS-1表达增加,促进MMP-2、MMP-9的基因转录,MMP-2、MMP-9表达升高,会刺激内源性抑制剂TIMP-1 TIMP-1的产生,引起MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1失衡,导致细胞外基质的沉积和胶原纤维的增生,进而导致气道修复与重塑。固本防哮饮能降低ETS-1对MMP2、MMP-9基因的转录,降低MNP2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达,调节MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1平衡,减少促纤维化细胞因子TGF-β1的表达,从而维持ECM内环境的稳定,减少杯状细胞分泌黏液,减少胶原的沉积,延缓气道重塑的进程。早期给予固本防哮饮,可预防气道重塑的产生。这可能是固本防哮饮延长哮喘缓解天数,减少哮喘发作次数的作用机制之一。4.OVA和RSV能促进B淋巴细胞产生IgE,还能促进T淋巴细胞分泌和释放细胞因子IL-1β、IL-6、IL-13,激活炎症细胞,释放炎症介质,产生炎症反应。固本防哮饮能够降低IgE的水平,在一定程度上抑制一些关键细胞因子IL-1β、IL-6、IL-13的分泌,减轻气道炎症反应。