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李氏杆菌属(listeria)有2个群7个种,其中单核细胞增多性李氏杆菌(Listeriamonocytogenes,LM)是一种重要的人畜共患病原菌及毒力最强的食源性病原菌之一,该菌能穿过人体及动物的肠道、血脑和胎盘三大屏障,引起人及动物的李氏杆菌病,主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多,病死率高达20%以上。 绵羊是本病最易感的动物,近年来新疆部分地区绵羊先后发生李氏杆菌病,为了探明其可能的传播机制,本研究采用了细菌分离与分子生物学的方法,对曾发生过绵羊李氏杆菌病的地区羊场绵羊及其相关环境中李氏杆菌的生态分布进行了调查,对分离得到的单核细胞增生性李氏杆菌的溶血素基因、内化素基因(inlB)和肌动蛋白基因(actA)进行了PCR检测与测序,比对分析不同来源分离株在毒力因子之间的相关性。 研究结果,从农六师新湖羊场、102团羊场、石河子市西部牧业种羊场、151团及农七师129团、131团和伊犁77团等规模化羊场的健康绵的羊口腔拭子、鼻腔拭子、肛门拭子,各羊场饮水、土壤、青贮及羊场鸟粪,共614份样品中共分离得到29株革兰氏阳性小杆菌,经培养特性、生化特性鉴定,并针对其种属基因设计引物采用多重PCR对分离的29株分离株进行鉴定,确定29株均为李氏杆菌。其中单核细胞增生性李氏杆菌5株,塞氏李氏杆菌24株。平均阳性率为4.7%,其中羊体阳性率为5.5%,青贮阳性率为0,饮水阳性率为33%,土壤阳性率为0,鸟粪阳性率为3.0%。29份阳性样品中单核细胞增多性李氏杆菌占17.2%。各羊场阳性率为0%~39.%不等,调查结果表明,同一羊场环境中健康绵羊李氏杆菌带菌率与其饲养环境中的李氏杆菌分布均有相关性。 对分离的李氏杆菌的溶血素毒力基因进行检测,阳性率为100%。并对分离的单核细胞增生性李氏杆菌的内化素基因(inlB)和肌动蛋白基因(actA)的测序结果分析表明,其与临床分离株的同源性为96%,具有较高的同源性。初步揭示绵羊李氏杆菌病的发生为内源性感染。 本研究通过对新疆健康绵羊羊体及其周围环境中李氏杆菌分布的多样性进行了生态研究,为探索李氏杆菌在特定环境中的保菌及可能的循环机制,丰富李氏杆菌的生态学和食物链上的传播维持规律的认识提供了重要的理论材料。