变应性结膜炎是眼科中常见的疾病,可引起患者眼部红肿、瘙痒等症状,甚至造成患者视力下降,给人类的日常生活带来了很多不便。金黄色葡萄球菌肠毒素在变应性结膜炎中发挥了重要的作用,因为眼睛是金黄色葡萄球菌接触的高频区之一,而金黄色葡萄球菌的致病性主要来源于肠毒素,所以由肠毒素介导的变应性结膜炎引起了广泛关注。治疗变应性结膜炎药物分为几类:组胺受体拮抗剂、肥大细胞稳定剂、前列腺素合成抑制剂、α受体阻断剂、免疫抑制剂等。虽然药物种类很多,但这些药物只能缓解不适症状,不能彻底治疗变应性结膜炎,所以研究新型抗过敏药物势在必行。本实验室人工合成了可以有效治疗结膜炎的抗菌肽ZY12,抗菌肽在天然免疫系统中发挥着重要的作用,它分子量小对热稳定,具有广谱的抗菌活性,在抗菌、抗虫、和免疫抑制等方面都发挥着重要作用。ZY12对金黄色葡萄球菌有着良好的抑菌效果,同时ZY12也可以抑制金黄色葡萄球菌肠毒素B引起的T淋巴细胞增殖。溶血性是药物开发的一个重要指标,ZY12在800 μg/ml时,溶血率仅为1.32%,可认为不具有溶血性。此外,通过MTT实验证实了 ZY12对小鼠巨噬细胞和人胚肾上皮细胞都不具有细胞毒性。我们还检测了多肽ZY12对小鼠的急性毒影响,通过尾静脉注射给药,当药物浓度在20 mg/kg时候,小鼠未出现任何不良反应,当浓度不断增加时,小鼠会出现倦怠,上眼睑松弛等症状,发生概率呈剂量依赖性。通过软件计算得出ZY12对小鼠的半致死浓度是94.05 mg/kg。通过一系列实验证实了 ZY12的毒性小,因此我们可以将其作为治疗变应性结膜炎的候选药物进行进一步的研究。通过ZY12对构建的变应性结膜炎动物模型的治疗,表明了 ZY12可以有效的减缓小鼠变应性结膜炎症状,并且呈现剂量依赖性。由于肥大细胞在变应性结膜炎中发挥着重要的作用,本实验通过结膜组织切片的方法,研究了 ZY12对变应性结膜炎中肥大细胞的数量和脱颗粒的影响,结果表明与对照组比ZY12可以显著的减少肥大细胞数量并且有效的抑制肥大细胞脱颗粒。同时在变应性结膜炎中,肥大细胞脱颗粒可以导致Th2(IL-4、IL-5、IL-13)型细胞因子的分泌量增多,Th1型(IFN-γ)细胞因子分泌量减少。本实验通过ELISA,分别检测了颈部淋巴结和脾中Th1型和Th2型细胞因子的含量,实验结果表明ZY12可以有效的减少Th2型细胞因子的分泌,并呈现剂量依赖性。由以上实验证明了 ZY12可以有效缓解结膜炎,为了进一步研究其作用机理,运用western blot技术,检测了 ZY12对结膜组织中TLR2和MAPK信号通路中Erk、Junk、P38磷酸化水平的影响。ZY12可以抑制Toll样受体2和MAPK信号通路中Erk磷酸化水平。初步证实了 ZY12可以通过对信号通路的影响,减少肥大细胞的数量和降低肥大细胞脱颗粒率,从而减轻小鼠变应性结膜炎的症状。该工作为研发治疗变应性结膜炎的新药物打下基础。