自制三种镍铬烤瓷合金的生物相容性评价——体外细胞毒性实验研究

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目的:本实验用自制三种镍铬烤瓷合金浸提液培养小鼠L929成纤维细胞,通过MTT法检测细胞增殖活力并计算相对增值率,从而对这三种合金的生物相容性进行初步检测,并与口腔科常用的镍铬合金,纯钛的生物相容性进行比较和评价,以便为该材料的临床应用提供生物学依据。结合国内外关于镍铬烤瓷合金的研究成果,研制开发的这种适合于临床应用的同类产品,进一步改善了其结构和性能,为其在国内口腔领域中的广泛应用奠定了生物学基础。 方法: 一.实验材料 将实验试样分为:A组:1号钢,B组:2号钢,C组:3号钢,D组:纯钛(Ti),E组:镍铬合金(Ni-Cr),F组:铅。将A-F组材料分别制成直径为15mm,高为4mm的扁圆柱体。消毒灭菌后,放入96孔培养板中,用RPMI1640培养液配制材料浸提液。选用传代的对数生长期的L-929细胞,用RPMI1640液配制成密度为1.0×105个/ml的细胞悬液备用。 二.实验方法 取96孔培养板,每孔加入细胞悬液100μl。在1-6组孔中分别加入A-F组的材料浸提液100μl,在第7组孔内加入RPMI1640培养液100μl后,放入培养箱中培养。分别于培养后的1-5天各取一块培养板,在倒置相差显微镜下观察活细胞的形态。在每孔中加入5mg/ml的MTT液20μl,继续培养4小时后取出。吸出培养液,在每孔中加入DMS0150μl,用自动酶标仪检测吸光度值。将各组的吸光度值作单因素方差分析和均数间两两比较的统计学分析。计算各组的细胞相对增值率(RGR)并作细胞毒性级评定。 结果: 一.细胞的形态学观察 培养24小时,阳性对照组中贴壁生长的细胞呈梭形或多角形,悬浮的细胞呈圆形或不规则形,胞质内出现空泡及颗粒状物质。其余各组的细胞几乎全部贴壁生长,形态正常,胞质均匀。培养120小时,阳性对照组中的细胞大部分脱落,胞质,胞核浓缩,甚至可见许多质膜崩解,核膜破裂的死亡细胞。其余各组细胞大部分继续贴壁生长,细胞密度增加,可见散在的悬浮的退化细胞及个别的死亡细胞。 二.统计学处理结果 金属材料组及阴性对照组与阳性对照组之间的吸光度值的差异均有统计学意义。五种金属材料组的细胞相对增殖率由大到小的顺序依次为:纯钛,1号钢,2号钢,3号钢,镍铬合金。1,2,3号钢对细胞均有极轻微的毒性,镍铬合金对细胞表现出1级细胞毒性,但统计学分析结果显示:五种金属材料组与阴性对照组的吸光度值之间的差异均无统计学意义。 结论: 本实验证实了1号钢,2号钢和3号钢均具有极微弱的细胞毒性,但符合材料对临床应用的生物相容性要求,为其在义齿烤瓷合金的临床应用提供了一定的生物学依据。从实验结果分析来看,1号纲最好,2号钢其次,3号钢稍差。
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