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赤潮是一种严重的全球性海洋灾害,它会造成严重的生态、资源、环境问题和重大的经济损失。近年来,赤潮发生次数增多,发生区域扩大,赤潮危害加剧。因此,寻求有效的赤潮防治方法成为当务之急。海洋细菌在赤潮生消过程中有着极其重要的作用,而细菌杀藻现象的发现也为微生物防治赤潮提供了新的可能途径,“菌藻关系”研究已经成为当前赤潮研究的重点和热点。
本论文选取典型有害赤潮藻——塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)作为主要研究藻种,从东海海域赤潮高发区分离筛选到能杀死塔玛亚历山大藻的3株海洋杀藻细菌。研究了这3株杀藻菌的杀藻方式、杀藻谱,并对它们所分泌的杀藻活性物质的性质的进行了初步研究。本文选取杀藻效果最好的菌株Joostella sp. DH77-1,以杀藻活性为导向从其提取物中分离、纯化具有杀藻活性的化合物,并从藻细胞生理生化指标响应入手研究其可能的杀藻机制。主要结论如下:
1.从东海海域赤潮高发区分离并筛选得到3株能杀死塔玛亚历山大藻的海洋细菌,经鉴定分属于Joostella属,交替单胞菌属(Alteromonas),盐单胞菌属(Halomonas),其中Joostella属是拟杆菌门(Bacteroidetes),黄杆菌科(Flavobacteriaceae)2008年发现的新成员。因此,菌株DH77-1也是Joostella属首次发现的杀藻细菌。
2.菌株DH77-1的杀藻作用方式是间接杀藻。菌株DHQ19,DH46两株菌可能兼顾直接杀藻和间接杀藻两种方式。菌株DHQ19属于盐单胞菌属(Halomonas),这是该属细菌直接杀藻的首次报道。这3株杀藻细菌的杀藻作用具有不同程度的种属特异性。
3.这3株杀藻细菌产生的杀藻活性物质都具有较好的热稳定性,对酸、碱都相对稳定,紫外照射处理和铅盐处理也对其杀藻活性物质的影响不大,但在反复冻融处理后,杀藻活性物质的活性微有下降。它们的杀藻活性物质可能是小分子物质,且极性较高。此外,还研究了这3株海洋杀藻菌无菌滤液的冻干粉杀藻效果,与无菌滤液相比,冻干粉的杀藻效果基本没有变化。因此,我们可以用冻干粉的形式对其进行保存,或进一步开发环保杀藻剂。
4.以杀藻活性为导向从菌株Joostella sp. DH77-1发酵液的提取物中分离纯化杀藻化合物,初步确定其分子量约为125.88,近一步的纯化鉴定工作仍在进行中。
5.在海洋杀藻细菌DH77-1杀藻活性成分胁迫下,塔玛亚历山大藻细胞内抗氧化系统自我防御体系积极响应,细胞总蛋白含量显著下降,SOD、POD比酶活水平显著增加,MDA含量增加;光合色素含量减少;藻细胞核酸泄漏情况严重。