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磷脂酶Al(Phospholipase Al,PLA1, EC3.1.1.32)可催化磷脂第一位酯酰键的水解,生成溶血磷脂和脂肪酸。酶法脱胶是植物油生产中去除磷脂比较高效、经济、环保的方法,而磷脂酶A1是酶法脱胶的关键,本文结合这一实际生产问题,主要进行以下方面的研究：(1)磷脂酶A1活力测定方法的确定。三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,来比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量少、结果稳定、精确性好的优点,确定将此方法用于磷脂酶A1的活力测定。(2)产磷脂酶A1菌株的筛选及初步鉴定。通过不断增加培养基中的卵磷脂浓度,筛选耐高浓度卵磷脂的菌株,结合菌落水解圈法筛选平板上生长良好并产生浑浊圈的菌株。多次筛选挑出具有较高磷脂酶A1活力的菌株Dx208,初始酶活4.52U/mL。根据该菌株的形态特征分析和16SrDNA基因序列初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。申请得到Genbank序列号为JN673819。(3)产磷脂酶A1菌株的发酵产酶条件优化。通过摇瓶培养,考察发酵条件对菌株Dx208产酶的影响。结果表明,当初始pH为7.0、培养温度为30℃、培养时间为5d,摇床转速为200r/min时,发酵液中磷脂酶A1活力可达7.15U/mL,是优化前的1.58倍。(4)产磷脂酶A1菌株的诱变选育。通过紫外、亚硝基胍诱变筛选产磷脂酶A1菌株,结果表明：最佳剂量紫外照射90s,NTG浓度为1500μg/mL,处理时间为90min。菌株Dx208经过紫外及亚硝基胍(NTG)单一和复合诱变后,最终得到一株Dx208-FH12,发酵磷脂酶A1活力为11.68U/mL,是出发菌株Dx208酶活(7.15U/mL)的1.63倍。且Dx208-FH12遗传稳定性良好。(5)优化发酵培养基组分。考察发酵培养基组分,不同碳源、氮源、无机盐对菌株产酶的影响。结果表明,菌株Dx208-FH12发酵产酶的最佳碳源为麦芽糖,氮源为(NH)4SO4+NH4Cl,无机盐为CaC12。经培养基组分优化后,菌株酶活力达13.57U/mL,是出发菌株Dx208酶活(7.15U/mL)的1.90倍。(6)菌株产磷脂酶A1油脂脱胶性能研究。将所筛菌株Dx208产磷脂酶A1用于脱胶,通过Plackett-Burman(PB)实验设计筛选出对脱胶影响较大的4个因素为反应时间、反应温度、pH值和加酶量。进行Box-Behnken中心组合实验及响应面分析,对于初始含磷量为254.30mg/kg的菜籽油,得到一个能较好预测菌株Dx208-FH12所产磷脂酶A1脱胶效果的模型回归方程,确定最优值：在反应时间为3.0h、反应温度52℃、pH值5.0和加酶量1.8mL/50g油的条件下脱胶油含磷量最低可降至18.57mg/kg。