番茄ShWRKY6基因的抗逆功能研究

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干旱,高、低温,高盐等不利环境条件会严重影响番茄的品质与产量,挖掘野生番茄资源中的优良变异基因,并对其进行功能研究,为番茄抗逆育种开辟了更直接、更简便、更有效的途径。WRKY基因受到外界环境的刺激而诱导表达,并广泛的参与植物的各种生理活动。目前有关WRKY基因的研究报道大多数在水稻、拟南芥等作物中,而番茄WRKY基因的研究报道还不多。本研究从野生多毛番茄LA1777中克隆出一个WRKY转录因子Sh WRKY6,构建了超量表达载体,转化到普通栽培番茄A57中,并对转基因株系进行了抗逆性功能研究。主要研究结果如下:1.ShWRKY6属于第II类b型WRKY蛋白,编码163个氨基酸,具有典型的WRKY结构域。与普通栽培番茄序列相比,有几处氨基酸位点的变化和氨基酸的插入及缺失。2.ShWRKY6在LA1777中呈组成型表达,主要在叶片中表达;诱导表达分析表明ShWRKY6受到干旱、高盐、ABA和MV等逆境胁迫诱导表达。3.构建ShWRKY6超表达载体,并将其转入普通栽培番茄A57,成功获得转基因植株。4.对五叶一心的苗期转基因植株进行抗逆胁迫实验,发现超表达植株的抗逆性显著好于对照。干旱胁迫下,转基因植株的表型明显好于对照A57,基本保持正常生长,叶片中MDA含量显著低于对照,脯氨酸和可溶性糖等渗透调节物质显著性高于对照,叶片气孔变小,番茄抗旱相关基因如CAT、SOD、APX、Sl TIP2、Msr B2的表达量显著提高,并且复水后成活率更高。转基因植株的抗氧化能力提高。高盐胁迫下,超表达株系离体叶片的叶绿素含量下降程度小于对照,脯氨酸和可溶性糖的含量显著性高于对照。低温胁迫下,转基因植株的叶片相对电导率和MDA含量显著性低于对照。5.以ShWRKY6蛋白为钓饵,Y2H筛选了在番茄中可能与之互作的候选蛋白,Membrane protein、Ferredoxin I、Calcium-dependent protein kinase 2,点对点验证,但它们与Sh WRKY6都不互作。
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