大熊猫属于世界濒危旗舰物种,由于栖息地的破碎化使得其种群孤立,甚至出现小种群灭绝。为了补充或者复壮小种群,野化放归成为保存其种群数量的重要手段。野化放归过程中,为了确定放归时间,除了观察大熊猫的行为特征等生物学数据之外,了解其肠道菌群的状况,是作为评估其野化状态的指标之一。肠道菌群研究方法主要有传统鉴定方法和分子生物学鉴定方法,其中分子鉴定方法是传统方法的有益补充与拓展,为肠道菌群的研究提供了更加精确的工具；PCR-DGGE技术是目前较为实用、图谱分辨率较高、方便快捷的一种方法。本试验首次连续跟踪采集野化培训过程中大熊猫粪便样品,即在2011年9月至2012年11月15个月期间,分别采集野生、圈养和野化培训大熊猫粪便样品8份、21份、39份,按照四季分组,分为5组。提取各样品总DNA,利用巢氏PCR、降落PCR扩增16S rRNA基因中的V3区基因片段,PCR-DGGE电泳得到各季节大熊猫肠道菌群多样性图谱,利用Quantity One等软件,分析指纹图谱得出大熊猫肠道菌群条带图、相似性矩阵及系统进化树,并利用所得数据对样品进行生物信息学分析。本试验还利用ERIC-PCR技术作为PCR-DGGE技术的参照,分析两种技术在分析大熊猫肠道菌群多样性的中优劣势。通过两种技术对比可以得出,PCR-DGGE技术相对于ERIC-PCR在反映动物肠道菌群多样性中,所获得图谱质量更高、多样性更全面,所反映的数据更准确,其优势也相对明显。分析表明,在5个季度(2011年秋季至2012年秋季)中,野化培训大熊猫与野生大熊猫肠道菌群结构相似性平均值依次为47.0%、50.1%、55.7%、44.8%和49.8%,与圈养大熊猫(不包括长沙动物园圈养大熊猫)菌群结构相似性平均值依次为53.6%、46.7%、53.5%、40.8%和48.6%。结果表明,在2011年秋季和2012年秋季,野化培训大熊猫与野生大熊猫的肠道菌群结构相似性由47.0%增大至49.8%,而与圈养大熊猫的肠道菌群结构相似性由53.6%减小至48.6%,证明野化培训过程中,野化培训大熊猫肠道菌群结构与野生大熊猫逐渐趋于一致,野化培训取得了一定效果。5个季度中,春季野化培训大熊猫与野生大熊猫肠道菌群结构相似性最大且偏差较小,选择此时放归大熊猫,外界环境对大熊猫肠道菌群的影响相对较小。研究发现,大熊猫草草野化培训过程中与野生大熊猫肠道菌群相似性由45.5%增加到59.7%,而锦竹则由53.9%降到52.9%,反映出,在同等条件下,大熊猫个体间肠道菌群结构相似性差异也十分显著。野化培训大熊猫草草、茜茜、锦竹、淘淘和张卡与野生大熊猫在冬季的肠道菌群相似性平均值分别为57.2%、50.5%、53.8%、41.6%和57.4%,而夏季分别为35.3%、54.6%、59.5%、52.4%和43.0%,发现夏冬两季野化培训大熊猫与野生大熊猫肠道菌群相似性规律不明显、偏差较大,推测应为野化培训大熊猫个体原因使得在较恶劣天气不能像野生大熊猫完全适应野外环境而导致个体间的差异。总之,笔者认为从肠道菌群相似性角度来看,该批大熊猫经过野化培训之后,宜于选择春季放归。