论文部分内容阅读
选用磷脂酶A1为工具酶,以响应面为数值分析方法,在正己烷有机相中进行了大豆粉末磷脂水解制备溶血磷脂研究。探讨了反应时间,温度,加酶量,底物浓度,加水量,pH对其反应的影响。基于最适模型,得到优化条件为:反应时间,12.1h;温度,45℃;加酶量,3%;底物浓度,20.8%;加水量,23.8%;pH,6;。该条件下验证得磷脂的酸值为76.7 mgKOH/g。所得产物中磷脂酰胆碱和1-酰基-溶血磷脂酰胆碱含量分别为15.51%和3.99%,且2-酰基-溶血磷脂酰胆碱相对含量为19.6%。以在一定条件下水解的大豆磷脂为原料,经超临界CO2法萃取其水解后的磷脂,得到溶血磷脂。对影响超临界CO2萃取的主要因素:温度、压力、时间进行了考察,并通过响应面试验对工艺条件进行了优化。试验结果表明:萃取温度54℃,萃取压力29MPa,萃取时间5.8h时为最佳条件下,脱油溶血磷脂萃取率可达92.4%。采用柱层析分离法对溶血磷脂粗品进行分离纯化,以硅胶(层析用)作为吸附剂,对洗脱剂、流速和加样量等因素进行了考察;根据试验数据,确定了最佳工艺条件:氯仿:甲醇为2:1的混合体系作为洗脱剂,流速3ml/min,加样量(样品质量/吸附剂质量)为0.025溶血磷脂·(g硅胶)-1,在此工艺条件下得到溶血磷脂的纯度为96.9%,其回收率为92.6%。以磷脂水解后的溶血磷脂粗品为原料,经过丙酮洗脱处理,研究了在一定的条件下洗脱温度、洗脱时间、洗脱液料比和洗脱次数对溶血磷脂纯化效果的影响;得到较优工艺条件为:洗脱时间15min,洗脱温度0℃,液料比15:1,洗脱次数8次。在此工艺条件下得到溶血磷脂的纯度为90.2%。选用脂肪酶Novozyme 435为工具酶,脱油溶血磷脂为原料,以响应面为数值分析方法,在无溶剂负压体系中进行了溶血磷脂酯交换试验。通过响应面试验和回归分析确定了最佳工艺条件为:反应时间为3.04h,加酶量为2.36%,摩尔底物比为4.43,加水量为8.44%,反应温度为50℃。在此条件下溶血磷酯交换结合率最高可达25.4。