背景和目的：胃癌是全球第4位常见的恶性肿瘤，也是第2位最常见的癌症致死性疾病，其中近一半的胃癌患者分布于东亚，且主要在中国。胃癌的发生过程是一个多因素、多步骤的过程，而大量研究证实幽门螺杆菌感染与胃癌的发生有密切的关系。全球感染幽门螺杆菌的自然人群比率超过总人口数的一半。世界卫生组织已将幽门螺杆菌列为胃癌的I类致癌因子。但Hp致胃癌的确切发病机制仍不清楚。由于人们生活条件和诊疗水平的提高，胃癌发病率和死亡率较前几年有所下降，可确诊时大多数患者已处晚期。因此，明确幽门螺杆菌的作用机制和胃癌的早期诊断对其治疗后和预后有着十分关键和重要的意义。PTEN是继p53之后发现的最有价值的一种新的抑癌基因，功能的失活与多种肿瘤的发生有关，因此，近年来相关的研究也成为一大热点。PTEN基因编码的蛋白质具有脂质和蛋白磷酸酶双重活性，能通过磷酸酶功能介导多条信号通路发挥作用，但磷酸化后会致使其功能丧失，许多相关研究显示蛋白的稳定性较磷酸化之前却明显增加，进而导致抑癌功能的丧失，使肿瘤易感性明显增加。PTEN蛋白可通过调控下游靶因子FAK在细胞粘附、迁移、增值、凋亡、骨架调节和生长等方面发挥重要作用。经查阅大量文献发现，最近几年PTEN/FAK信号通路在人类多种肿瘤的发生、发展过程中也起重要作用。目前认为Hp感染常在胃癌中起着始发和先导作用，但如何通过PTEN/FAK信号通路影响胃癌发生、发展机制尚不明确。为此，本课题将通过体内、外研究探讨PTEN/FAK信号通路在胃黏膜癌变过程中作用及其与Hp感染的关系。研究方法：1.采用免疫组化方法来检测人体胃黏膜标本的慢性非萎缩性胃炎（chronicnon-atrophic gastritis，CNAG，40例）、肠上皮化生（intestinal metaplasia，IM，40例）、异型增生（dysplasia，Dys，40例）和胃癌（gastric cancer，GC，45例）中PTEN、p-PTEN、FAK和p-FAK蛋白的表达。2.采用免疫组化方法分别检测，在6月和12月ATCC43504Hp菌株感染的蒙古沙鼠（60只）和以布氏肉汤灌胃的蒙古沙鼠（30只）中PTEN、p-PTEN、FAK和p-FAK的表达。3.行Western blot分别检测ATCC43504Hp菌株作用GES-1细胞0、0.5h、1h、3h、6h和12h（MOI=50：1）后，PTEN/FAK信号通路相关蛋白的表达。4.构建高表达PTEN蛋白的不同胃黏膜上皮细胞株，再以ATCC43504Hp标准菌株以MOI=50作用高表达各目的基因的胃黏膜细胞，以同体积细胞培养液作为对照组，共培养1h后行Western blot检测PTEN、p-PTEN、FAK和p-FAK蛋白的表达情况。5.通过Transwell试验观察细胞的侵袭情况并计数，我们用ATCC43504Hp标准菌株以MOI=100作用高表达各目的基因的胃黏膜细胞株，同时以同体积低血清细胞培养液作为对照组，分别作用20h。结果：1.人胃黏膜癌变过程中PTEN、p-PTEN、FAK和p-FAK的表达情况及其与Hp感染的关系（1）免疫组化结果显示PTEN表达水平在CNAG最高，随胃黏膜病变进展而逐渐降低，在GC表达最低，其中IM分别与CNAG和Dys组间无显著性差异（p>0.05），其余各病变阶段间表达有显著性差异。p-PTEN表达水平在CNAG最低，随胃黏膜病变进展而逐渐升高，在IM表达最高，在Dys和GC均有较高水平表达，其中GC与CNAG、IM和Dys间均无显著性差异（p>0.05），其余各病变阶段间有显著性差异。我们按Hp阳性和阴性将所有标本均分两组，分别比较各病变阶段间的变化。在Hp阳性组的各病变阶段PTEN蛋白表达趋势呈现上述类似的结果（p<0.001）；在Hp阴性组，GC分别与CNAG和Dys间有显著性差异（p<0.05）。同时，p-PTEN表达在Hp阴性组各病变阶段亦呈现出类似结果（p<0.001），而在Hp阳性组p-PTEN均有较高水平表达，但各病变阶段之间的表达差异无意义（p>0.05）。（2）FAK主要定位于胞浆，其表达水平在CNAG组和IM均较低，在后两组表达均较高，在CNAG分别与Dys、GC有显著性差异（p<0.05）。p-FAK表达水平在CNAG最低，随胃黏膜病变进展而逐渐升高，在IM表达最高，在Dys和GC组均有较高水平表达；在Dys分别与IM、GC间无显著性差异，其余各病变阶段间有明显的差异（p<0.05）。如上所述，按Hp阳性和阴性分两组，在Hp阴性组CNAG与GC组间FAK蛋白的表达有显著性差异（p<0.05）；而Hp阳性组各病变阶段FAK蛋白均有较高水平表达，无显著性差异（p>0.05）。Hp阳性组和阴性组p-FAK蛋白表达CNAG均与其他三组间有明显的差异（p<0.05）。（3）按组织标本各病变阶段的不同，各自分为Hp阳性和阴性两组进行比较。结果发现在胃黏膜病变各阶段，Hp阳性和阴性组间PTEN蛋白表达均无明显的差异（p>0.05）；而在CNAG阶段p-PTEN表达水平在Hp阳性组高于阴性组（p<0.05），在其余三个阶段Hp阳性和阴性组间无显著性差异（p>0.05）。在CNAG、IM和Dys阶段，FAK和p-FAK蛋白表达两组间无显著性差异（p>0.05）。在GC阶段，FAK蛋白表达在Hp阳性组明显低于阴性组（p<0.05），但p-FAK蛋白表达无显著性差异（p>0.05）。2.在蒙古沙鼠中Hp感染对PTEN和FAK蛋白的影响（1）比较蒙古沙鼠6月和12月的实验组间差异，结果显示PTEN蛋白的表达水平均无显著性意义（p>0.05），且对照组间也无明显差异（p>0.05）。而在12月Hp实验组与对照组中p-PTEN蛋白的表达均显著高于6月组（p<0.001）。分别比较实验组和对照组的差异，6月和12月两组中PTEN蛋白的表达均无显著性差异（p>0.05）；6月组p-PTEN蛋白的表达水平无明显变化（p>0.05），而12月组中Hp感染组p-PTEN表达水平显著高于对照组（p<0.001）。（2）比较蒙古沙鼠6月和12月的实验组间差异，发现12月组FAK蛋白的表达水平显著高于6月组（p<0.001），且对照组间也存在明显差异（p=0.001）；而实验组中12月p-FAK表达水平显著高于6月（p<0.01），而对照组中12月组与6月组无明显差异（p>0.05）。分别比较实验组和对照组的差异，在6月和12月组FAK蛋白的表达水平均无明显差异（p>0.05）；6月组中p-FAK表达水平无显著性差异（p>0.05），而12月组中Hp感染组显著高于对照组（p<0.05）。3. Hp作用GES-1后对PTEN/FAK信号通路的影响Hp活菌按50：1的浓度作用于GES-1细胞不同时间后，Western blot检测PTEN和FAK表达在各时间点均无明显变化（p>0.05），同时p-PTEN蛋白表达水平在各时间点均明显升高，早期就开始升高（0.5h，p<0.001），1h达到高峰；p-FAK表达水平在作用后0.5h即升高，随时间的延长表达均明显的增强，3h达到高峰，12h内均高于0h（p<0.001）。而对照组PTEN、p-PTEN、FAK、p-FAK表达均无明显变化（p>0.05）。4. PTEN在Hp活菌激活胃黏膜上皮细胞株PTEN/FAK信号通路中的作用（1）Hp标准菌株按50：1的浓度分别作用于GES-1细胞、GES-1-Empty细胞、GES-1-PTEN-WT细胞和GES-1-PTEN-MT细胞1h后，PTEN表达均无明显变化（p>0.05），而p-PTEN表达水平在对照组中GES-1和GES-1-Empty，GES-1-PTEN-WT和GES-1-PTEN-MT均无明显差异（p>0.05）。而与对照组相比，在GES-1、GES-1-Empty、GES-1-PTEN-WT和GES-1-PTEN-MT均明显的升高（p<0.001、p<0.001、p=0.001和p<0.05）。（2）Hp活菌按50：1的浓度分别作用于GES-1、GES-1-Empty、GES-1-PTEN-WT和GES-1-PTEN-MT1h后，FAK表达均无明显变化（p>0.05），而p-FAK与对照组相比，在GES-1、GES-1-Empty和GES-1-PTEN-WT均明显的升高（p<0.001、p<0.001和p<0.05），而GES-1-PTEN-MT则无明显变化（p>0.05），且在GES-1-PTEN-WT明显低于GES-1（p<0.05）。5. Hp活菌通过PTEN/FAK信号通路对胃黏膜上皮细胞株侵袭性的影响Hp活菌按100：1的浓度分别作用于GES-1细胞、GES-1-Empty细胞、GES-1-PTEN-WT细胞和GES-1-PTEN-MT细胞20h后，检测侵袭的细胞个数。与对照组相比，Hp作用后四组细胞的侵袭迁移个数均显著的增加（p<0.05）；在对照组中，GES-1-PTEN-WT细胞数显著少于GES-1（p<0.001），而GES-1-PTEN-MT显著的增加（p<0.001）。结论：1、PTEN表达下降和磷酸化及FAK、p-FAK的高表达与胃黏膜癌变过程密切相关。2、Hp感染的早期即可激活PTEN/FAK信号通路，其机制可能是通过Hp感染诱导PTEN磷酸化导致磷酸酶活性降低，从而激活下游的FAK，故我们推测磷酸化是PTEN蛋白一种新的失活方式。3、Hp感染通过使PTEN磷酸酶失活进而提高胃粘膜上皮细胞的侵袭能力。