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目的:自身免疫性甲状腺炎(AIT)是典型的器官特异性自身免疫病,是在遗传和环境因素的作用下,引起免疫稳态失衡,产生针对自身抗原的特异性抗体为病理特征,从而引起疾病的发生。多项研究证实了AIT患者存在T细胞分化及功能失衡,表现为:以Th1、Th17表达增多为主伴有调节性T细胞功能缺陷。外泌体像是体内的信号载体“储存池”,含有有效的免疫刺激性物质,有免疫刺激和免疫调节的作用。GW4869是外泌体抑制剂,它能在体内或体外抑制外泌体的分泌。双氢青蒿素(DHA)是天然青蒿素的衍生物,除了具有显著的抗疟疾作用外,还具有抗炎和调节免疫的作用,被发现在许多疾病中参与对T细胞免疫的调节过程,能够影响T细胞激活、增殖、分化、凋亡以及亚群功能等诸多关键环节。综上所述,我们认为外泌体参与了自身免疫性甲状腺炎的发病。因此,我们在AIT动物模型中应用外泌体抑制剂,在体内阻止外泌体的分泌,来证实外泌体在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用。同时应用双氢青蒿素,观察其能否减少外泌体的分泌,并改善自身免疫性甲状腺炎。研究方法:第一部分:4周龄NOD.H-2h4小鼠随机分成4组:正常组(CON):无菌去离子水喂养;高碘组(HI):0.05%碘化钠水喂养;高碘+抑制剂组(HI+GW4869):0.05%碘化钠水喂养,同时腹腔注射GW4869 2.5mg/kg每只鼠,隔日一次;正常+抑制剂组(CON+GW4869):无菌去离子水喂养,同时腹腔注射GW4869 2.5mg/kg每只鼠,隔日一次。正常组和高碘组腹腔注射等剂量含DMSO生理盐水,隔日一次,均于12周龄时处死。第二部分:4周龄20g左右的NOD.H-2h4小鼠,随机分为正常组(无菌去离子水喂养)和高碘组(0.05%碘化钠水喂养),在8周龄时将高碘组随机分为4组:高碘组(0.05%碘化钠水)、DHA(H)组(0.05%碘化钠水+DHA50mg/kg)、DHA(M)组(0.05%碘化钠水+DHA 25mg/kg)、DHA(L)组(0.05%碘化钠水+DHA 12.5mg/kg),DHA组予以相应剂量的DHA灌胃,高碘组与正常组予以等剂量含DMSO生理盐水灌胃,每天一次,12周龄时处死。留取血清,检测小鼠血清Tg Ab水平以及提取外泌体,留取甲状腺并称重,计算甲状腺相对重量、评价小鼠炎症状态。无菌条件开腹取脾脏并称重,计算脾脏相对重量、进行流式细胞分析T淋巴细胞各亚群比例。脾脏提取总RNA,实时定量RT-PCR检测相应细胞因子Th1(T-bet、IFN-γ)、Th17(ROR-γt、IL-17)、Treg(Foxp3)m RNA的表达。结果:1.通过腹腔注射GW4869的研究:1)甲状腺冰冻切片HE染色发现与正常组及正常+GW4869组相比,高碘组及高碘+GW4869组的小鼠甲状腺炎症评分显著升高(P<0.0001),且高碘组与高碘+GW4869组之间无显著差异;2)ELISA检测4组小鼠血清Tg Ab滴度,发现与高碘组相比,正常组和正常+GW4869组小鼠的血清Tg Ab水平显著降低(P<0.05),但高碘组与高碘+GW4869组之间无显著差异;3)流式细胞术检测4组小鼠脾脏T淋巴细胞亚群比率,发现4组中Th2、Treg淋巴细胞比率之间无明显差异。与正常组相比,Th1和Th17细胞比率在高碘组和高碘+GW4869组中升高(P<0.05),但二组之间无明显差异。与正常+GW4869组相比,Th17细胞比率在高碘组和高碘+GW4869组中升高(P<0.05)。2.通过灌胃DHA的研究:1)计算甲状腺相对重量发现,与正常饮水组相比,高碘组及DHA(L)组的甲状腺相对重量显著增加(P<0.001和P<0.05);与高碘组相比,DHA(H)组的甲状腺相对重量降低(P<0.05);虽然DHA各剂量组间甲状腺相对重量无显著差异,但随着剂量的减少,存在递增趋势。甲状腺冰冻切片HE染色评分发现与高碘相比,正常组以及DHA各剂量组小鼠甲状腺炎症评分显著下降(P<0.01)。与正常组相比,DHA(L)组小鼠甲状腺炎症评分增加(P<0.05);2)ELISA检测5组小鼠血清Tg Ab滴度,发现与高碘组相比,正常组、DHA(H)和DHA(M)组血清Tg Ab水平显著降低(P<0.05),且随着DHA剂量的降低,Tg Ab水平逐渐升高;3)计算小鼠脾脏相对重量发现,与高碘组相比,正常组、DHA(H)和DHA(M)组的脾脏相对重量显著降低,且随着DHA剂量的增加,脾脏相对重量呈递减趋;4)流式细胞术检测5组小鼠脾脏T淋巴细胞比率,虽然未发现有显著差异,但是与高碘组相比,Th1和Th17细胞比率在正常组和DHA组呈下降趋势,Treg细胞呈升高趋势,且随着DHA剂量的增加,Th1细胞比率逐渐降低。结论:1、GW4869未降低AIT小鼠血清Tg Ab水平及改善甲状腺的炎症,T淋巴细胞各亚群的比率也无明显差异。2、经DHA治疗后的小鼠血清Tg Ab水平降低、甲状腺淋巴细胞浸润改善,且甲状腺及脾脏相对重量以剂量依赖性的方式下降,这些结果表明,用DHA治疗通过抑制免疫和淋巴细胞浸润改善了AIT小鼠的状况。同时DHA亦降低了AIT小鼠中Th1和Th17细胞的比率,增加了Treg细胞,证明DHA可通过调节T淋巴细胞的失衡来改善AIT。